アルカリホスファターゼ from bovine intestinal mucosa

ウシの腸管内のアルカリホスファターゼは二量体で、膜由来の糖タンパク質です。少なくとも3つのアイソフォームが存在し、通常は単量体あたり2つのN結合型グリカンと1つ以上のO結合型グリカンを有します。

ウシの腸管内のアルカリホスファターゼは二量体で、膜由来の糖タンパク質です。少なくとも3つのアイソフォームが存在し、通常は単量体あたり2つのN結合型グリカンと1つ以上のO結合型グリカンを有します。2　本酵素は、作用するために亜鉛、並びにマグネシウム又はカルシウムのニ価イオンを必要とします。

本酵素は、約12%の炭水化物(ヘキソース6%とその他の中性糖6%)を含む糖タンパク質です。アルカリ・ホスファターゼの各分子は4つの亜鉛原子と4つのジスルフィド架橋を含みます。アルカリ・ホスファターゼの活性はマグネシウム存在下で最大に達します。p-ニトロフェニルりん酸、フェニルりん酸、フェノールフタレインりん酸、α-グリセロールりん酸、β-グリセロールりん酸、2-ホスホリルグリセラート、トリオースりん酸、グルコース-6-りん酸、グルコース1-りん酸、フルクトース1-りん酸、フルクトース6-りん酸、アデノシン5-りん酸、アデノシン3-りん酸、ホスホエノールピルビン酸、β-ニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチドりん酸などのりん酸モノエステルの加水分解を触媒します。ヒ素塩、システイン、ヨウ素、無機りん酸塩、ピロりん酸塩、ジイソプロピルりん酸、トリフェニルりん酸、ジイソプロピル・フルオロりん酸、およびL-フェニルアラニンは、アルカリ・ホスファターゼの強力な阻害物質の一部です。

アルカリホスファターゼは、脱リン酸化カゼインなどのタンパク質に用いることができます。アルカリホスファターゼを用いて、DNAまたはRNAの5'-末端を脱リン酸化し、セルフライゲーションを予防することもできます。DNAまたはRNAは、アルカリホスファターゼによる脱リン酸化後に(T4ポリヌクレオチドキナーゼにより)放射性同位元素標識リン酸をタグとして融合することもできます。

アルカリホスファターゼを使用して抗体とその他のタンパク質に結合し、ELISA、ウエスタンブロット、および組織化学的検出を行います。 カゼインなどのタンパク質と核酸の脱りん酸化に日常的に使用されます。 高感度が求められる場合はタンパク質の標識化に使用できます。 アルカリ・ホスファターゼをDNAまたはRNAの5′末端脱りん酸化に使用して、セルフライゲーションも防止できます。アルカリ・ホスファターゼによって脱りん酸化した後、(T4ポリヌクレオチド・キナーゼにより)放射性標識りん酸エステルでDNAまたはRNAにタグを付けることもできます。 製品P5521はGTP加水分解の研究に使用されています。

シグマの本酵素は、ホスファチジルイノシトール4-りん酸とホスファチジルイノシトール4,5-ビスりん酸のアッセイに使用されています。Nafion^™修飾電極を使用したアルカリ・ホスファターゼ・アッセイにも使用されています。

抗体及びタンパク質接合に対して推奨される高い比活性グレードを有します。

ウシ腸粘膜由来のアルカリ・ホスファターゼは7.5～9.5のpH範囲で最も安定です。本酵素はアルコール、アミン、ピロりん酸、およびフェノール類のりん酸エステルに広い特異性をもち、その活性には亜鉛、マグネシウムまたは2価のカルシウム・イオンが必要です。

本酵素はアルコール、アミン、ピロリン酸、及びフェノールのリン酸エステルに対して広い特異性を有しています。タンパク質及び核酸を脱リン酸化するために、日常的に使用されます。

3.2 M硫酸アンモニウム、1 mM MgCl₂および0.1 mM ZnCl₂中の溶液、pH 7.0

アフィニティ-精製

本製品はウシ腸粘膜から調製されます。希釈液は10 mM Tris-HCl、pH 8.0、1～5 mM塩化マグネシウム、0.1～0.2 mM塩化亜鉛、50%グリセロール中で調製し、2～8°Cで保管しなければなりません。

タンパク質はBiuret法で測定。

容量は、DEA unitに基づいています。

1 DEAユニットは、pH 9.8、37°C、1分間に、1 μmolの4-ニトロフェニルリン酸を加水分解する酵素量です(1 グリシンユニットは約3 DEAユニットに相当します)。

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