TEV プロテアーゼ

タバコエッチ病ウイルス（TEV）プロテアーゼは、リコンビナントタンパク質からの融合タグの除去に有用なツールです。

TEV プロテアーゼは、タバコエッチ病ウイルス NIa プロテアーゼの触媒ドメインを組み換えたものです。 TEV プロテアーゼは、C4 ペプチダーゼファミリーに属する、特異性の高いシステインプロテアーゼです。

修飾された 52 kDa の TEV プロテアーゼコンストラクトは、グルタチオンまたは His-Select^® アフィニティメディアを使用して容易に除去できる GST および His タグの両方を含んでいます。

TEVプロテアーゼは、分子量27 kDaに相当する（NIa）プロテアーゼ触媒ドメインを有しています。本化合物は特異性が高くユニークであり、低温で活性を示します。

TEVプロテアーゼは、イネOryza sativa由来の遺伝子組換えマイトジェン活性化プロテインキナーゼ14（MAPK14）、コネキシン43（Cx43）C末端フラグメントおよびδ1-ピロリン-5-カルボン酸レダクターゼからのヒスチジンタグの除去に使用されています。また、ヒト白血病細胞株K562由来精製プロテアソームの溶出にも用されています。

ストレプトアビジン-アガロースに固定化した TEV プロテアーゼは、融合タンパク質の切断に効果的なツールです。 TEVプロテアーゼはまた、炎症活性のためのnlrp1b のタンパク質分解処理の研究にも使用されています。

TEVプロテアーゼは、厳密な7つのアミノ酸の切断配列であるGlu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓Gly/Ser を認識します。

タバコエッチ病ウイルス（TEV）プロテアーゼは自己消化しますが、TEVプロテアーゼの変異体は自己消化に耐性があります。遺伝子組換えTEVプロテアーゼの細菌発現は収量低下および溶解度低下をもたらします。緑色蛍光タンパク質融合TEVプロテアーゼの使用は、これらの低下を克服し、構造ゲノミクス研究でのアプリケーションを見出します。

幅広い温度域での高い安定性と特異性のために、最適な組み換えおよび精製が行われています。

25 mM Tris-HCl、pH 8.0、50 mM NaCl、1 mM TCEP および 50％グリセロール溶液中で、2 mg/mL 以上の濃度で出荷されます。

グリセロール溶液

切断プロトコル
新しい透析バッファーを準備します。透析バッファーは、ターゲットタンパク質の溶解度に最適化し、タンパク質阻害剤を含めないでください。 また、透析バッファーは、ダウンストリームの精製プロセスに適合させてください。例えば切断された His-タグの除去に HIS-Select^® カラムを使用する場合は EDTA や DTT の量を最小にしてください。
適切な透析バッファーの例：25 mM Tris-HCl、pH 8.0、150 - 500 mM NaCl、14 mM β-メルカプトエタノール
本 TEV プロテアーゼは、150 mM NaCl または 500 mM NaCl および 400 mM イミダゾール中でも同等の活性を示します。
ターゲットタンパク質の溶液を、透析バッファーで1 ～ 2 mg/mLに希釈してください。ターゲットタンパク質が透析バッファー中で凝集する場合は、任意です。PAGE 解析用のコントロール用に、少量を小分けして保存してください。ターゲットタンパク質が EDTA に適合しており、これを HIS-Select^® カラムから溶出する場合は、最終濃度 0.5 mM の EDTA を添加できます。
プロテアーゼとターゲットタンパク質の比率が 1 ： 100（w/w）または、ターゲットタンパク質 100 mg に対して TEV プロテアーゼが 10,000 ユニット（1 mg）となるように、TEV プロテアーゼを加えてください。モル比を計算する必要はありません。TEV プロテアーゼは、ターゲットタンパク質に直接添加できます。バッファーを変えたり、TEV プロテアーゼを希釈する必要はありません。最適な比率は、経験的に決定してください。1 ： 50 ～ 1 ： 200 のプロテアーゼ：ターゲットタンパク質比率（w/w）が、ほとんどのターゲットタンパク質に有効な範囲です。
4°C で約 16 時間、透析バッファーに対して透析してください。透析は、HIS-Select^® やグルタチオンアフィニティカラムを、切断したタグや TEV プロテアーゼの除去に使用する場合に、イミダゾールやグルタチオンの除去を目的として行われます。
通常、1 mg の TEV プロテアーゼは、4°C、16 時間で、100 mg のコントロールタンパク質の >90％ 以上を切断します。

TEV プロテアーゼの 1 ユニットは、3 μg のコントロール基質を、pH 8.0、30°C、1 時間で、85％切断します。

HIS-Select is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany