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Merck

細胞の健康状態の分析

生細胞・死細胞の二重染色

細胞健康状態解析用の試薬、キット、およびツールは、細胞培養の活力を示す一般的および特異的な指標を測定します。生存率アッセイは、細胞の健康状態を一般的に評価するため、あるいは細胞毒性アッセイと併せて処理の影響を評価するために使用されます。増殖アッセイでは、多くの場合、条件や処理による細胞の代謝活性を測定する指標として、DNA合成や細胞分裂が用いられます。細胞毒性キットでは、生体還元法による測定結果を用いて代謝活性を評価することができます。  

培養物の汚染は、効率的かつ信頼性の高い細胞培養における最も一般的な障壁の一つです。一部の汚染物質は、培養物を注意深く顕微鏡で観察することで検出可能ですが、マイコプラズマのような汚染物質は目視による検出方法では見逃されてしまいます。したがって、培養物については、微生物による汚染を確実に検出できるキットや試薬を用いて、定期的にスクリーニングを行う必要があります。汚染の発生を最小限に抑え、発生した場合は除去する試薬は、無菌操作や適切な培養室管理を補完する、培養室に不可欠なものです。


Products






細胞生存率および増殖アッセイ

細胞増殖および生存率を測定するアッセイは、様々な刺激による処理後の培養細胞の反応や健康状態をモニタリングするために用いられます。適切なアッセイ法の選択は、評価対象となる細胞の数や種類、および期待される結果によって異なります。細胞増殖アッセイでは、経時的な細胞数の変化、細胞分裂回数、代謝活性、あるいはDNA合成をモニタリングすることができます。 トリパンブルーやカルセイン-AMなどの生存染色剤を用いた細胞計数により、増殖率と生存細胞の割合の両方を把握することができます。5(6)-カルボキシフルオレセインジアセテートN-サクシニミジルエステル(CFSE)(21888SCT110)は、細胞集団が経験した細胞分裂の回数を測定するために広く用いられています。 細胞内に取り込まれると、CFSEは細胞内エステラーゼによって切断され、蛍光化合物が生成される。また、サクシニミジルエステル基は細胞内タンパク質の第一級アミンと共有結合する。細胞分裂が行われるたびに、各娘細胞の蛍光強度は半分になるため、フローサイトメトリーを用いて細胞分裂回数を簡単に検出することができる。

96ウェルプレートで示されるように、生存細胞によるMTTのフォルマザン塩への代謝

96ウェルプレートで示されるように、生存細胞によるMTTのフォルマザン塩への代謝

細胞の生存率および増殖を測定するための当社の包括的なツールおよびソリューションは、さまざまな手法を採用しており、以下が含まれます:

  • DNA合成増殖アッセイ
  • 代謝増殖アッセイ
  • 発光式細胞生存率アッセイ
  • 蛍光色素増殖アッセイ
  • 3D培養用 生存細胞/死細胞/全細胞の3色染色法
  • トリパンブルー色素排除法による生存細胞数測定

細胞毒性アッセイ

代謝活性を測定するアッセイは、増殖、生存率、および細胞毒性の解析に適しています。MTTやXTTなどのテトラゾリウム塩が着色したフォルマザン化合物へと還元される反応、あるいはレサズリン(R7017TOX8)の生体還元は、代謝が活発な細胞においてのみ起こります。活発に増殖している細胞は代謝活性を高めますが、毒素に曝露された細胞などのストレスを受けた細胞では、代謝活性の低下が認められます。

アポトーシスアッセイ

細胞死は、発生過程および恒常性維持において、多くの正常な生理機能に不可欠です。アポトーシスとしても知られるプログラムされた細胞死を回避する腫瘍細胞の能力は、ほとんどの種類のがんの特徴的な特徴です。 細胞表面受容体、アダプター、プロテアーゼ、ミトコンドリア成分など、多種多様な細胞内タンパク質が、細胞の生存とアポトーシスによる死との間の微妙なバランスを調節しています。アッセイを慎重に選択することで、細胞培養条件や処理が細胞の健康状態に及ぼす影響だけでなく、それらが細胞の健康状態に及ぼすメカニズムの解析にも役立ちます。当社は、アポトーシスの初期、中期、後期を検出するための包括的なアッセイ製品群を提供しています。

細胞汚染の検出と除去

汚染のない細胞培養を維持することは、細胞を用いた研究において極めて重要です。細胞培養において最も普遍的な問題の一つに、マイコプラズマによる汚染があります。マイコプラズマは、サブミクロンサイズの形態と細胞壁を持たないという特徴を持つ細菌属であり、顕微鏡による検出が困難または不可能である上、多くの抗生物質に対して耐性を示します。 マイコプラズマは通常、細胞死を引き起こすことはありませんが、代謝の調節異常、増殖の低下、染色体異常など、培養細胞に様々な影響を及ぼします。要するに、マイコプラズマによる汚染は、ライフサイエンス研究において有意義なデータを提供する上で、影響を受けた細胞株の信頼性を損なうことになります。

DAPIやHoechstなどの一般的なDNA検出試薬は、蛍光顕微鏡を用いて、汚染された培養物中のマイコプラズマの存在を明らかにする。

当社のマイコプラズマ検出・除去用ツールには、以下のものがあります:

  • LookOut® マイコプラズマ PCR 検出キット、および細胞培養中のマイコプラズマを確実かつ高感度で検出するためのその他の PCR および qPCR キット
  • マイコプラズマ培養法による検出用のトリプトースリン酸培地およびその他の試薬
  • 蛍光DNA染色法によるマイコプラズマ検出用のDNA染色剤
  • マイコプラズマの除染に用いる「LookOut® Mycoplasma Erase」スプレーおよび試薬

関連リソース

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