分子クローニングおよびタンパク質発現
分子クローニングの目的は、目的遺伝子（GOI）をプラスミドベクターに挿入することです。プラスミドベクターとは、クローニング、クローンの選別、およびタンパク質発現を容易にするためのさまざまな要素を含む環状のDNAです。 研究者は、その後のタンパク質発現に向けて、GOIを発現ベクター内にフレームを崩さずに挿入するために、しばしばDNA制限酵素やリガーゼを用いる。その後、このベクターは、GOIによってコードされるタンパク質を発現する細胞に導入されるか、あるいは無細胞タンパク質合成システムを用いてタンパク質発現が行われる。
タンパク質が発現されると、細胞内シグナル伝達、形態、あるいは細胞内のその他の側面への影響を通じて、その機能を研究することができます。あるいは、タンパク質を大量に発現させ、精製して、数多くの下流工程での応用にも活用することが可能です。詳細については、昆虫、細菌、および哺乳類のタンパク質発現システムにおけるクローニングおよび発現ワークフロー全般でご利用いただける、信頼性の高い試薬やリソースの包括的なラインナップをご覧ください。
Products
RNAおよびDNA修飾酵素
分子クローニングにおいて、研究者はDNAを切断するために制限酵素を、また核酸上の化学基を付加・除去・修飾するためにRNAおよびDNA修飾酵素などの酵素を頻繁に使用します。多様な研究ニーズに応えるため、当社はアルカリホスファターゼ、プロテアーゼ、T7 RNAポリメラーゼ、ピロホスファターゼ、リボヌクレアーゼA、T4 DNAリガーゼなど、これらの必須酵素を幅広く取り揃えています。 当社の試薬は、特別に調製された緩衝液と組み合わせることで、DNAおよびRNAの操作において高い効率と信頼性を確保するのに役立ちます。
Novagen® pETシステム、Simplicon®ベクター、およびUCOE®タンパク質発現システム
当社の大腸菌、昆虫、および哺乳類発現ベクターは、陽性形質転換体の選別を簡素化します。主な製品には以下が含まれます：
- Novagen® pETシステムは、細菌系における組換えタンパク質のクローニングおよび発現におけるゴールドスタンダードとして広く認められています。
- Simplicon® イン・ビボタンパク質発現システムは、ゲノムに組み込まれず、調整可能で、合成された自己複製型RNAに基づく発現システムを提供します。Simplicon® 発現システムは、ゲノムへの組み込みリスクなしに、トランスフェクトされたヒト細胞において、複数の遺伝子からの即時的かつ高水準で持続的なタンパク質発現を実現します。
- Ubiquitous Chromatin Opening Element（UCOE®）発現ベクター技術は、安定的にトランスフェクトされた哺乳類細胞において、30日未満で数グラムのタンパク質産生を実現します。UCOE®発現技術は、トランスジーンのサイレンシングを防ぎ、染色体への組み込み部位にかかわらず、従来のベクターよりも一貫性が高く、安定した、かつ高レベル（最大20倍）の遺伝子発現をもたらします。
細菌および酵母の形質転換試薬
細菌形質転換とは、ヒートショックやエレクトロポレーションなどの手法を用いて、外来DNAを細菌に導入することです。当社のコンピテントセル製品群は、困難な実験条件下であっても、プラスミドおよびタンパク質の発現が最適化されるよう設計されています。主な特長は以下の通りです：
- NovaBlue®コンピテントセルは、効率とプラスミドの保存性に最適化されており、優れたライブラリ調製とプラスミドの安定性を実現します。
- Rosetta™、Origami™、およびOvernight Express™システムは、タンパク質の適切な折り畳みを促進し、細胞毒性タンパク質の溶解性や発現量を向上させます。
酵母形質転換については、タンパク質発現ワークフローにシームレスに統合できる、簡便なプロトコルとスケーラブルな製品を提供しています。
哺乳類細胞の研究については、当社の「トランスフェクション」ページでその他のオプションをご確認ください。
BCCM/GeneCornerのプラスミドベクター
ゲント大学（UGent）理学部生物医学分子生物学部門が運営する、ISO 認証を取得した独自のプラスミドリポジトリである BCCM/GeneCorner の、拡充されたプラスミドベクターのラインナップをご覧ください。この多様なコレクションには、さまざまな標的生物を対象とした、多種多様なクローニング用および組換えタンパク質発現用プラスミドが含まれており、分子生物学およびタンパク質生物学における最先端の研究を支援します。
各製品の販売は、シグマ・アルドリッチの「サードパーティ製品を購入するエンドユーザー向け販売規約」の条件、および法令、規制、その他法律により課される制限に従うものとします。
- お客様は、研究、教育、または品質管理の目的において、合法的な方法でのみ本製品を使用することができます。本製品の商業的利用には、提供者による事前の書面による承認が必要であり、書面による契約の対象となる場合があります。かかる承認は、不当に差し控えられることはありません。 「商業的利用」とは、営利を目的とした本製品の利用（営利を目的とした本製品の再販売、リース、交換、ライセンス供与、その他の譲渡、および営利を目的としたサービス活動の遂行のための本製品の利用など）を意味します。
- お客様は、本製品の購入が自己使用のみを目的としていることを表明し、保証するものとします。その他の用途（仲介業者としての本製品の購入など）を目的とした購入には、提供者の事前の書面による承認が必要です。
- お客様は、すべての出版物において、本製品の販売者としてプロバイダーを明記し、当該本製品に関連するプロバイダーのカタログ番号を記載することに同意するものとします。
関連リソース
- パンフレット：『分子の基礎ガイド』
当社の包括的な分子ツールおよび試薬が、お客様のワークフローに、正確で即座に利用できるソリューションをどのように提供するかをご覧ください。
- 記事：無細胞タンパク質合成または発現
Cell-free protein synthesis rapidly produces recombinant proteins without cells, utilizing translation machinery from different cell types for efficiency.
- 記事：形質転換細胞の選別と大腸菌マーカーガイド
用途、形質転換効率、および遺伝子型に基づいて、適切な形質転換細胞を選択してください。また、参考として大腸菌のマーカー一覧も掲載しています。
- 記事：Simplicon™ 生体内タンパク質発現システム
Simplicon: A non-genome integrating, tunable and sustained protein expression system in human cells, based on a single, polycistronic, and self-replicating synthetic RNA.
- Cloning & Expression Vectors
Expression Vectors for Bacterial, Mammalian and Insect Cell Systems. Featured are a variety of tags, promoters and elements for secretion, transient, stable and bicistronic expression.
- タンパク質発現系
遺伝子工学により、研究のための遺伝子組換えタンパク質の大規模な発現・単離が可能になります。
- Troubleshooting for Molecular Cloning
Molecular cloning is the process of inserting the gene-of-interest (GOI) into a plasmid vector and this vector is then inserted into a cell that expresses the protein encoded by the GOI. Once protein is expressed in the cell, the protein expression can be used for different studies (such as cell signaling, morphology or other aspects).