二次抗体
抗フォン・ヴィレ抗体を用いて染色した、馬の過剰肉芽組織（プロウド・フレッシュ）。
二次抗体は、一次抗体やFc領域、Fab領域などの抗体断片に結合するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体です。通常、検出、精製、または選別用途に有用なプローブで標識されています。
弊社では、さまざまな宿主種由来の二次抗体を取り扱っています。弊社のポリクローナル二次抗体は、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジなどの宿主動物の血清から作製されています。一方、モノクローナル二次抗体は、マウスのハイブリドーマクローンから作製されています。
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当社の検索ツール「Antibody Explorer」をご利用いただくと、クローナリティ、用途、種、反応性、標識、宿主種、形態ごとに抗体を閲覧・比較することができます。
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有糸分裂中のイモリの肺細胞の蛍光顕微鏡写真。モノクローナル抗^抗体で染色された微小管。
マウス抗ニューロフィラメントHおよびCF568ヤギ抗マウス抗体で染色したラットの視神経の凍結切片（神経突起、赤）、ウサギ抗GFAPおよび高度に交差吸着されたCF488Aヤギ抗ウサギ抗体（グリア細胞、緑）。核はRedDot2で染色されている（シアン）。
標識抗体およびプローブ
当社は、幅広い種類の標識抗体を取り揃えております。標識抗体とは、標識と結合したモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であり、多様なアッセイ手法における検出に使用されます。二次抗体の具体的な用途は、その抗体に結合しているプローブによって決まります。プローブとは、さまざまな検出技術を支える分子のことです。標識二次抗体における最も一般的な検出システムは、比色法または蛍光法です。
比色アッセイは、通常、アルカリホスファターゼ（ALP）やホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）、あるいはその誘導体の使用に基づいています。 ビオチン・アビジン（ストレプトアビジン）複合体の結合システムは、ALPやHRPの比色信号を増幅するためによく使用されます。最も一般的な蛍光アッセイでは、フルオレセインイソチオシアネート（FITC）、ロダミンまたはその誘導体、テトラメチルロダミンイソチオシアネート（TRITC）、シアニン（Cy3）、またはフィコエリトリン（R-PE）が利用されます。
当社は、検出、精製、選別、および顕微鏡観察用途向けに、さまざまな比色標識および蛍光標識と結合させたコンジュゲート抗体を提供しています。コンジュゲート抗体は、さまざまな宿主動物で生産されているため、幅広い免疫化学試薬との互換性があります。研究上、独自の試薬に標識を付与する必要があるユーザー向けに、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体に各種標識（ビオチン、FITC、CF™標識）を結合させるための抗体標識キットも提供しています。
プロテインA、G、およびL
プロテインAは黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）に由来する。プロテインGは連鎖球菌（Streptococcus）属に由来する。いずれも哺乳類のIgGのFc領域に対する結合部位を有している。これらのタンパク質とIgGとの親和性は、動物種によって異なる。プロテインGは、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウシのIgGに加え、マウスIgG1およびヒトIgG3に対しても高い親和性を示す。 プロテインAは、ネコおよびモルモットのIgGに対してより高い親和性を示す（表1）。天然のプロテインGには、IgGのFc結合部位に加え、アルブミン、IgのFab領域、および膜結合部位に対する結合部位が含まれており、これが非特異的染色の原因となる可能性がある。これらの問題は、このタンパク質の組換え型を作製することで解決されている。 組換えプロテインGは、アルブミン結合領域を排除するように設計されており、組換えプロテインG′は、Fc結合部位を保持しつつ、アルブミン、Fab、および膜結合部位を欠く切断型タンパク質であり、天然型よりもIgGに対して特異性が高い。
Peptostreptococcus magnus由来のプロテインLは、さまざまな種のカッパ軽鎖（表2）に対して親和性を示します。このプロテインLは、モノクローナルまたはポリクローナルのIgG、IgA、IgMに加え、カッパ軽鎖を含むFab、F(ab′)2、および組換え単鎖Fv（scFv）断片を検出します。また、ニワトリのIgGにも結合します。 注：ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマなど、その免疫グロブリンがほぼ完全にラムダ鎖のみで構成されている種は、プロテインLにほとんど結合しないか、まったく結合しない。
検出試薬
プロテインAおよびGは、哺乳類組織中の一次抗体や表面IgGを結合させるための、汎用かつ種非特異的な試薬として使用されます。 プロテインGは、マウスやラットを含むほとんどの種に推奨される。プロテインAは、ネコやモルモットに推奨される。いずれの試薬も、IgAやIgMの検出、Fab断片の検出、あるいは鳥類のIgGの検出には推奨されない。アガロースのような樹脂に結合させた場合、プロテインAおよびプロテインGは、血清や腹水から免疫グロブリンを親和性精製するために使用できる。
プロテインLは、哺乳類または鳥類の一次抗体、あるいはすべてのクラスの表面Igを結合させるための汎用試薬として使用される。特に、Fab断片、F(ab′)2断片、および組換えscFv断片の検出、Fc受容体に結合したIgの検出、あるいはウシIgが存在する条件下でのモノクローナル抗体の検出に有用である。使用は、カッパ軽鎖を有するIgの検出に限定される。
樹脂
プロテインAおよびプロテインGには、哺乳類IgGのFc領域に対する結合部位がある。これらのタンパク質がIgGを結合させる能力は、種によって異なる。一般に、IgGはプロテインAよりもプロテインGに対して高い親和性を示し、プロテインGはより多様な種のIgGに結合することができる。 各種IgGサブクラス、特にマウスおよびヒト由来のIgGがプロテインAに対して示す親和性は、プロテインGの場合よりもばらつきが大きい。したがって、プロテインAを用いることで、一部の種からアイソタイプ純度のIgGを調製することができる。プロテインLは、ウシIgGによる汚染なしに、細胞培養上清からマウスモノクローナル抗体を単離するのに適している。
マウス抗チューブリン抗体およびCF488Aヤギ抗マウス二次抗体で染色したHeLa細胞（微小管、緑色）。アクチンフィラメントはCF640Rファロイジンで染色されている（紫色）。核はDAPIで対比染色されている（青色）。
関連リソース
- 記事：二次抗体の選び方
二次抗体を選ぶ判断において考慮すべき主な因子をご説明します。動物種、サブクラス、アイソタイプ、標識などについてご確認ください。
- 記事：免疫蛍光法プロトコルのヒント
免疫蛍光法では、タンパク質の局在化、修飾の確認、タンパク質複合体の可視化のために抗体結合蛍光分子を使用します。
- 記事：結合抗体および二次抗体の使用
標識抗体によって安定性が異なり、長期間にわたって最大の活性を保持するためには、必要なバッファーや保存条件も異なります。精製済み抗体および標識抗体の標準的な抗体バッファーと保存条件をご確認ください。