ヌクレアーゼ（DNaseおよびRNase）

制限酵素

DNAおよびRNAの消化用ヌクレアーゼ 

当社のヌクレアーゼは、切断特異性に加え、最適pHなどの特性もさまざまであり、研究者は実験のニーズに最適な消化酵素を選択することができます。例えば、哺乳類由来のデオキシリボヌクレアーゼIは、末端が5’ P1となる産物を生成し、Penicillium citrinum由来のものは、一本鎖DNAおよびRNAを分解しますが、二本鎖DNAは分解しません。 リボヌクレアーゼAは、タンパク質サンプルやプラスミドDNA製剤に混入したあらゆるRNAを加水分解します。これらの酵素の多くは、分子生物学においてその他の用途も持っています。例えば、DNase IはDNAに「切り込み」を入れ、標識された塩基の取り込みを可能にします。RNase Aは、特定のmRNAの量を測定するRNaseプロテクションアッセイにおけるツールとして用いられます。

デオキシリボヌクレアーゼIおよびデオキシリボヌクレアーゼII（DNase）酵素

デオキシリボヌクレアーゼIは、二本鎖および一本鎖DNAのエンドヌクレアーゼ的切断を触媒し、5'-ホスホジヌクレオチドおよび5'-ホスホオリゴヌクレオチドの末端生成物を生成する。加水分解の生成物は、5'-リン酸モノヌクレオチドとオリゴヌクレオチドの複雑な混合物である。 マグネシウムイオンが存在する場合、DNase IはDNAの各鎖に独立して作用し、切断部位はランダムになる。マンガン(II)が存在する場合、DNase IはDNAの両鎖をほぼ同じ部位で切断する。ほとんどのプロトコルではDNase Iにマグネシウムイオンを使用するが、特定の目的ではマンガンが使用される。 さらに、デオキシリボヌクレアーゼIIは、二本鎖および一本鎖DNAの内切酵素的切断を触媒し、ヌクレオシド3'-リン酸および3'-ホスホオリゴヌクレオチドを最終生成物として生成します。活性が認められるpH範囲は4.0～6.5ですが、pH 6.5での活性は約15%にとどまり、最適pHは5.0です。 この酵素の安定性はpH 5～5.5で最適であり、30 °CでpH 8.5になると急速に不活性化します。当社は、さまざまなサンプルタイプや用途に対応するため、幅広いDNase酵素のラインナップをご用意しています。凍結乾燥品であれ液体であれ、当社のDNaseの一部には、不要な消化からサンプルを保護するために、RNaseやプロテアーゼの含有量が著しく低く抑えられているものもあります。

リボヌクレアーゼA、リボヌクレアーゼH、およびリボヌクレアーゼT1 RNase酵素

リボヌクレアーゼAは、RNAのエンドヌクレアーゼ的切断を触媒し、ヌクレオシド3'-リン酸およびCpまたはUpで終わる3'-ホスホオリゴヌクレオチドを生成します。RNase Aの活性化因子には、カリウム塩やナトリウム塩があります。活性の最適温度は60 °Cですが、この酵素は15～70 °Cの範囲で活性を示します。 pHの最適値は7.6で、活性範囲は6～10である。最も高い活性は一本鎖RNAに対して示される。RNase Aは非常に安定した酵素であり、100 °Cまでの温度に耐えることができる。 100 °Cでは、RNase AはpH 2.0～4.5の範囲で最も安定である。リボヌクレアーゼHは、RNA:DNA二重鎖中のRNAのホスホジエステル結合を特異的に加水分解し、3'-ヒドロキシル末端および5'-リン酸末端を持つ生成物を生成する。この酵素は、DNA-RNAハイブリッド（相補的なDNA鎖と水素結合しているRNA）のうち、RNA成分のみを分解する。

さらに、リボヌクレアーゼT1は、RNAの2段階のエンドヌクレアーゼ的切断を触媒し、ヌクレオシド3'-リン酸および主にGpで終わる3'-ホスホオリゴヌクレオチドを生成する。この反応では、グアニジンリボヌクレオチドの3'-リン酸基と、隣接するヌクレオチドの5'-ヒドロキシル基との間で切断が起こる。 初期生成物は2':3'環状リン酸ヌクレオシドであり、これは加水分解されて対応する3'-ヌクレオシドリン酸となります。溶液中では、熱（pH 6で100 °C、10分間）や酸に対しては耐性がありますが、アルカリ性溶液（pH 9以上）では不安定です。 なお、この酵素によって触媒される反応は、反応混合物を100 °Cまで加熱しても停止させることができない点に留意する必要がある。当社は、多様なサンプル種や用途に対応するため、幅広いRNase酵素のラインナップを提供している。凍結乾燥品であれ液体製品であれ、当社のRNaseの一部には、望ましくないタンパク質の切断からサンプルを保護するために、プロテアーゼが極めて低濃度で配合されているものもある。