Mammalian Cell Culture

포유류 세포 In Vitro 성장

세포 성장은 당, 아미노산, 알부민, 비타민, 무기물 및 성장 요소를 포함한 영양소의 복합체 혼합물이 필요합니다. 세포 배양 배지는 in vitro 포유류 세포 배양을 위해 이러한 필수 영양소를 공급합니다. 포유류 세포 배양은 포유류 혈액과 유사한 pH 수준을 유지하기 위해 최적 온도(37°C)와 5% CO₂에서 성장을 위한 멸균 환경을 제공하는 인큐베이터에서 재배됩니다.  

부유물에서 배양될 수 있는 특정 종류의 혈액 세포를 제외하고, 포유류 조직에서 유래한 대부분 세포는 적절한 세포 분열 및 성장을 위해 표면에 부착되어야 합니다. 세포 배양 표면은 처리된 폴리스틸렌 또는 유리 플라스크, 플레이트 및 세포 부착을 위해 디자인된 필터로 공급합니다. 세포 부착은 poly-D-lysine(PDL)과 같은 합성 폴리머 및 접착을 위한 부착 구조를 제공하는 콜라겐과 같은 세포외 기질 단백질을 사용하여 촉진할 수 있습니다.  

포유류 세포 배양 기법

세포 성장 in vitro의 오염을 방지하기 위해 무균 기법을 사용합니다. 포유류 세포 배양에는 세포 건강과 증식을 위해 confluence에 도달한 세포를 희석하고 고갈된 배양 배지를 교체하는 계대배양 또는 subculturing이 필요합니다. 부착성 세포 배양을 계대배양하려면, 재부착을 위해 새로운 배양 플라스크 또는 플레이트로 이전하기 전에 세포는 트립신처리와 같은 효소적 방법이나 긁기와 같은 기계적 방법을 사용하여 배양 표면에서 분리되어야 합니다. 혈구계(hemacytometer) 및 자동화된 세포 계수기를 이용하는 세포 계수법은 세포의 생존성을 평가하며 계대배양을 위한 파종 밀도 및 다운스트림 공정을 위해 적절한 세포 밀도를 결정하도록 돕습니다. 배양된 세포는 액체질소에 보관하여 냉동 보존될 수 있으며, 작업용 균주액이 다시 필요하면 보존용 균주액을 해동할 수 있습니다.