qPCR
정량 실시간 PCR(qPCR)은 형광 리포터 분자를 사용하여 증폭 산물의 정량화를 가능하게 합니다. 기존 PCR과 마찬가지로 DNA, cDNA 또는 RNA 템플릿이 증폭되지만, 각 사이클마다 형광 신호를 모니터링하여 상대적 또는 절대적 정량화를 수행합니다.
이 기술은 유전자 발현 분석, 유전자형 분석, 마이크로RNA 분석, 유전적 변이 분석, 단백질 분석 등 다양한 연구 분야에 유용하게 활용됩니다.
주요 카테고리
중합효소 연쇄 반응(PCR)은 분자생물학 실험실에서 핵심적인 역할을 합니다. PCR은 DNA를 수십 배에서 수백 배까지 증폭하는 데 사용되며, 당사의 시약 및 자원은 유전자 발현 분석, 유전자형 분석, 염기서열 분석, 돌연변이 유도 등 다양한 연구 워크플로우에 적합합니다.
곤충, 박테리아 및 포유류 단백질 발현 벡터를 이용한 신뢰할 수 있는 클로닝과 안정적인 단백질 발현을 위한 분자 클로닝 및 단백질 발현 방법과 프로토콜.
qPCR 데이터 분석 방법
리포터 분자의 형광을 측정하고 정량화합니다. 일반적으로 이러한 리포터 분자는 이중가닥 DNA의 염기 사이에 삽입되는 염료(예: SYBR® Green, 에티디움 브로마이드)이거나, DNA상의 특정 서열에 결합하도록 설계된 프로브(예: 분자 비콘, TaqMan® 프로브)입니다.
qPCR 데이터의 상대적 정량
qPCR 데이터의 정량 방법에는 크게 두 가지가 있습니다. 더 일반적으로 사용되는 상대적 정량법은 ΔΔCt 정보를 활용하여, 대조 유전자와 비교하여 시료 내 표적 유전자의 발현 또는 풍부도 비율을 결정하고, 기준 유전자의 발현 비율로 정규화합니다. 표적 유전자와 기준 유전자의 효율(E) 값이 서로 다르기 때문에, 이 방법은 E 값의 차이도 고려합니다. 이 방법은 유전자 발현 분석에서 더 자주 사용됩니다.
qPCR 데이터의 절대 정량
두 번째 방법인 절대 정량법은 환경 미생물학 분야에서 더 흔히 사용되며, 표준 곡선(SC)을 활용합니다. SC 방법은 알려진 템플릿 농도 N0의 희석 계열을 사용하여 log(N0) 대 CT(역치 주기)의 선형 회귀 분석을 통해 표준 곡선을 생성합니다. 이를 통해 시료의 템플릿 농도를 계산합니다. 이 방법의 기본 전제는 시료의 효율 값이 표준의 효율 값과 동일하다는 것입니다.
관련 기사
- 기존 PCR이 완료된 후에는 아가로스 젤 또는 최근에는 모세관을 통해 분해하여 PCR/qPCR 데이터 분석을 수행합니다.
- 정량적 PCR 검출은 기본적인 PCR 기술을 기반으로 하며, 연구자들이 시료 내 시작 물질의 양을 훨씬 더 넓은 동적 범위에서 추정할 수 있게 합니다.
- PCR assay guide navigates you through primer validation and other assay optimization factors to ensure high sensitivity and specificity for optimum DNA/ RNA quantification.
- PCR workflow's variability influenced by sample source, reverse transcription, and assay design, impacting reproducibility.
- 핫스타트(Hot Start) PCR의 목적은 비특이적 증폭을 줄이고 프라이머 이량체의 형성을 방지하며 제품 수율을 높이기 위해 PCR 반응을 억제하는 것입니다.
- 모두 보기 (41)
관련 프로토콜
- SYBR Green qPCR 프로토콜은 유전자 발현 및 RT-PCR 반응의 정확한 정량화를 감지하도록 설계된 방법입니다.
- Chromatin Immunoprecipitation qPCR for studying gene regulation across conditions.
- Primer Concentration Optimization Protocol creates reaction matrix for testing primer concentrations against various partners.
- Optimization of qPCR conditions is important for the development of a robust assay. The two main approaches are optimization of primer concentration and/or annealing temperatures.
- 프로브 기반 화학 반응을 이용한 다중 qPCR은 광범위한 최적화와 검증이 필요한 까다로운 응용 분야입니다.
- 모두 보기 (30)
더 많은 기사와 프로토콜 찾아보기
도움이 필요하신가요?
궁금한 점이 있으시면 고객 지원 요청을
제출해 주시거나, 고객 서비스 팀에 문의해 주십시오:
이메일 custserv@sial.com
또는 전화 +1 (800) 244-1173