BioIVT 냉동 보존 자연살해 세포를 이용한 ADCC 분석
그림 1.ADCC의 작용 기전
일반적으로 말초혈 세포에서 정제할 수 있는 자연살해(NK) 세포가 효과세포로 사용됩니다. 냉동보존된 NK 세포는 ADCC 분석을 수행하는 연구자들에게 보다 유연하고 즉시 사용 가능한 솔루션을 제공합니다.
본 연구에서는 루시페라제 발현 A549 세포를 표적 세포로 사용하여 냉동 보존된 NK 세포의 ADCC 분석 적용 가능성을 탐구하였다. 표적 세포 표면의 EGFR에 결합하여 세포 사멸을 매개하기 위해 인간 항-EGFR 재조합 항체를 사용하였다. 표적 세포의 루시페라제 활성 변화를 측정하여 세포 사멸을 평가하였다.
ADCC 프로토콜
냉동 보존된 NK 효과 세포를 이용한 ADCC 분석의 간략한 워크플로는 그림 2에 제시되어 있습니다. 냉동 보존 세포로 분석을 수행하는 데 필요한 팁과 요령, 재료, 분석 최적화 등을 포함한 완전한 단계별 프로토콜은 냉동 보존된 NK 효과 세포를 이용한 ADCC 프로토콜을 참조하십시오.
그림 2.ADCC 프로토콜
냉동 보존된 NK 효과 세포를 이용한 ADCC 분석
냉동 보존된 NK 세포를 루시페라제 발현 A549 표적 세포와 6:1 및 18:1의 E:T 비율로 배양했으며, 24시간 동안 농도가 증가하는 항-EGFR 항체가 존재하는 조건에서 반응을 진행했습니다. 실험은 중복으로 수행되었다(그림 3). 냉동 보존된 NK 효과 세포는 24시간 시점에서 ADCC 분석 시 강력한 표적 세포 사멸을 나타냈다(표준 곡선으로부터 생세포 수를 보간할 때, E:T 비율 6:1에서 43.8% 세포 사멸, E:T 비율 18:1에서 76.6% 세포 사멸). ADCC 분석에서 계산된 항-EGFR 항체의 EC50은 E:T 비율 6:1에서 1.5 ng/mL, E:T 비율 18:1에서 2.5 ng/mL였습니다.
그림 3.냉동 보존된 자연살해세포(NK 세포)를 효과 세포로, 루시페라제 리포터 유전자를 발현하는 A549 세포를 표적 세포로, 그리고 증가하는 농도의 항-EGFR 항체를 사용한 ADCC 분석.
동결보존된 NK 효과 세포를 사용한 분석법의 재현성을 확인하기 위해, 동일한 기증자로부터 제공된 서로 다른 바이알의 NK 세포를 각 실험마다 사용하여 세 가지 서로 다른 실험 간 결과를 비교하였다. 데이터는 모든 ADCC 분석에서 유사한 세포 사멸 비율(각 E:T 비율에서)과 유사한 항-EGFR 항체 EC50 값을 보여 분석법의 재현성이 확인되었다(그림 4).
그림 4.냉동 보존된 NK 효과 세포를 이용한 ADCC 분석의 재현성. 항-EGFR 항체에 대해 각 E:T 비율에서 유사한 표적 세포 사멸률 및 EC50 값이 관찰되었다.
기증자 간 변이성을 확인하기 위해, 서로 다른 세 명의 기증자로부터 얻은 냉동 보존된 NK 세포 세 로트를 ADCC 분석에서 시험하였다. 모든 기증자의 NK 세포는 18:1의 E:T 비율에서 50% 이상의 세포 사멸을 나타냈다. 각 E:T 비율에서 유사한 비율의 표적 세포 사멸이 관찰되었다. 계산된 항-EGFR 항체의 EC50 값은 모든 ADCC 분석에서 유사하였다(그림 5).
그림 5.다양한 기증자로부터 얻은 냉동 보존 NK 세포를 이용한 ADCC 분석의 재현성. E:T 비율 6:1 (A) 또는 E:T 비율 18:1 (B).
냉동 보존이 면역 세포 기능에 미치는 영향
냉동 보존된 말초혈액 단핵구(PBMCs) 및 면역 세포는 신선하게 분리된 면역 세포에 비해 편리하고 즉시 사용 가능한 대안을 제공합니다. 머크는 냉동 보존된 자연살해세포(NK 세포)의 항체의존성 세포독성(ADCC) 분석 성능을 평가했습니다. ADCC 분석에는 더 긴 배양 시간(24시간)이 필요했지만, 강력한 세포 사멸 효과와 재현 가능한 항-EGFR 항체 용량-반응 결과가 관찰되었습니다. 냉동보존된 NK 세포 및 PBMC는 항체의존성 세포독성(ADCC) 분석에서 높은 재현성을 가진 데이터를 얻기 위해 신선하게 분리된 면역세포에 대한 실용적인 대안을 제공합니다.
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