카파 바이오시스템즈 qPCR 시약 및 키트
정량적 실시간 PCR 키트 및 시약
정량적 PCR(qPCR) 및 qRT-PCR 반응에는 정확하고 신뢰할 수 있는 시약이 필요합니다. 머크의 qPCR 및 qRT-PCR 시약과 키트는 가장 까다로운 템플릿과 시료에서도 일관된 결과를 제공하도록 설계되었습니다. 머크 qPCR 시약을 살펴보고 qPCR 워크플로우 효율을 개선하며 차세대 혁신을 정량화하는 방법을 알아보세요.
KAPA PROBE FAST
모든 프로브 기반 qPCR 응용 분야를 위한 정밀하고 재현성 있으며 다용도 키트.
KAPA PROBE FAST qPCR 키트는 모든 프로브 기반 qPCR 응용 분야에 대해 빠르고 재현성 있는 결과를 제공합니다. 이 키트에는 가수분해 프로브(예: TaqMan®), FRET 프로브 및 치환 프로브(예: 분자 비콘)를 포함한 서열 특이적 형광 생성 프로브 화학 물질을 사용하여 매우 민감하고 정확한 실시간 PCR을 위한 즉시 사용 가능한 마스터 믹스가 포함되어 있습니다.
- 프로브 기반 qPCR 응용 및 장비와의 호환성
- SNP 유전자형 분석에서의 분리 클러스터
- 넓은 동적 범위
- 고처리량 워크플로우를 위한 고안정성 마스터 믹스
탁월한 재현성과 효율성 달성
- 빠르고 고성능의 5색 멀티플렉스 PCR
- 낮은 사본 수에서도 유사한 풍부도 수준 달성
- 최대 10차원의 넓은 동적 범위
그림 1.5점 희석 시리즈 전반에 걸쳐 5개 증폭 산물에 대한 결과를 고속 사이클링 프로토콜을 사용한 펜타플렉스 분석으로 획득하였다. 반응 용량에는 또한 인간 게놈 DNA(0.39~100 ng), 각 프라이머 200 nM, 각 가수분해 프로브(ACTB - FAM™/BHQ®-1, ERBB2 - CAL Fluor® Gold 540/ BHQ-1, ERBB3 - CAL Fluor Orange 560/ BHQ-2, EGFR - CAL Fluor Red 610/ BHQ-2, ACTG1 - Quasar® 705/ BHQ-2)을 포함하였습니다. 다음과 같은 고속 사이클링 프로토콜을 사용하였습니다: 95ºC에서 3분간 유지한 후, 95ºC 15초, 60ºC 15초로 구성된 40회의 사이클을 수행하였습니다.
대립유전자를 정확히 구별하다
- 이형접합체와 동형접합체 대립유전자의 탁월한 구별
- SNP 유전자형 분석에서의 분리된 클러스터
그림 2.총 168개의 인간 게놈 DNA 샘플과 24개의 템플릿 미포함 대조군이 ABI 7900HT 실시간 PCR 시스템에서 ATP1B3 SNP 유전자형 분석법을 사용하여 성공적으로 유전자형 분석되었습니다. 반응 용량에는 인간 게놈 DNA(10 ng), 각 프라이머 200 nM, 각 가수분해 프로브(대립유전자 X – FAM/ BHQ®-1, 대립유전자 Y – VIC/ BHQ-1) 200 nM이 포함되었으며, 다음과 같은 표준 사이클링 프로토콜을 사용했습니다: 95ºC에서 10분간 유지한 후, 95ºC, 15초; 60℃에서 60초.
유연성 향상
- 표준 및 고속 사이클링 프로토콜 모두와 호환
- 정확한 정량화 유지
그림 3.증폭 플롯은 표준 사이클링 프로토콜(95ºC 10분 후 95ºC 15초, 60ºC 60초로 40회 반복) 또는 고속 사이클링 프로토콜(95ºC 3분 후 95ºC 3초, 60ºC 20초로 40회 반복)을 사용하여 생성되었습니다. 60ºC, 20초). 반응 용량에는 인간 게놈 DNA(반응당 0.1 ng ~ 100 ng 범위에서 10배 희석), 각 프라이머 200 nM, hApoB100(FAM/BHQ-1) 가수분해 프로브 200 nM이 포함되었다.
KAPA PROBE FORCE
KAPA PROBE FORCE는 DNA 정제 과정 없이도 효율적인 샘플-Cq 워크플로우를 가능하게 하는, 머크 최고의 억제제 내성 qPCR 마스터 믹스입니다. 이 마스터 믹스에는 혈액, 조직 및 식물 PCR 억제제를 극복하도록 진화한 3세대 DNA 중합효소가 포함되어 있습니다. 정제된 DNA로 추출한 샘플과 동등한 정확도, 재현성 및 감도를 가진 원시 샘플을 분석하십시오.
- KAPA PROBE FORCE는 다음을 제공합니다:
- 원시 혈액, 조직 및 식물 추출물로부터 직접 qPCR 수행
- 1시간 이내의 샘플-Cq 워크플로우
- 정확하고 재현성 있으며 민감한 결과를 위한 높은 효율성
- 이염 억제제에 대한 우수한 내성
- 원추출물과의 멀티플렉스 호환성
간소화된 샘플-Cq 워크플로우
KAPA PROBE FORCE는 신속한 원유 DNA 추출 방법의 사용을 가능하게 하며 캐리오버 억제제를 극복합니다. 기존 혈액, 조직 및 식물 qPCR 워크플로우에 사용되는 경쟁사 마스터 믹스는 강력한 상류 샘플 처리(예: 컬럼 정제 또는 뉴클레아제 분해)를 필요로 합니다.
- 원시 샘플에서 직접 증폭하여 샘플 정제의 시간과 비용을 제거
- 전혈, 세포, 생쥐 꼬리, FFPE, 잎, 줄기, 씨앗, 토양 등 다양한 샘플 유형 분석 가능
정확하고 재현 가능한 결과를 생성합니다
- 키트에는 강력한 표적 증폭 및 검출을 위해 진화된 3세대 DNA 중합효소가 포함됩니다
- 효소는 PCR 억제제가 존재하는 환경에서도 높은 반응 효율을 유지하여 신뢰할 수 있는 데이터 생성을 보장합니다
그림 5. 고효율 표적 증폭.억제제가 첨가된 시료에서 달성된 반응 효율을 조사하고 정제된 DNA의 효율과 비교하였다. 다양한 억제제 유형에 걸쳐 효율은 90~110% 범위 내에 유지되었다.
고농도 qPCR 억제제 돌파
KAPA PROBE FORCE는 테스트된 모든 억제제에서 관찰 가능한 Cq 지연 없이 일관되고 강력한 증폭 성능을 보여줍니다.
- 억제된 혈액, 조직 및 식물 샘플에 대한 더 높은 수준의 민감도 달성
- 정제된 DNA 분석을 원유 워크플로로 전환하더라도 데이터 품질 저하 없이 수행 가능
그림 6. 광범위한 고농도 억제제 내성.KAPA PROBE FORCE 및 경쟁사 마스터 믹스의 기준 성능은 각 제조업체의 권장 사이클링 조건에 따라 정제된 DNA로 표준 곡선을 생성하여 측정했습니다. 연속 희석은 다음 범위에서 수행되었습니다: 인간: 100 ng – 10 pg; 생쥐: 100 ng – 10 pg; 식물: 25 ng – 8 pg; 박테리아: 2 ng – 2 fg. 억제제는 Cq 값에 미치는 영향을 확인하기 위해 정제된 DNA 샘플에 고농도로 개별 첨가되었습니다.
다중 원시 샘플을 효율적으로
- 원유 DNA 추출물의 단일 반응 대립유전자 판별을 통한 유전자형 분석 가속화
- 귀중한 샘플로부터 데이터 수집을 극대화하고 처리량을 증가시키며 비용을 절감합니다
그림 7. Cru5e 샘플 이중 가닥 단일 염기 다형성(SNP) 검출.KAPA PROBE FORCE는 거친 추출물 존재 시에도 정확한 유전자형 분석과 밀접한 클러스터링을 제공합니다. (A) 목화씨, 0.5M NaOH 추출; (B) 포도나무 잎, 75 mM Tris-HCl 및 5 mM TCEP 추출; (C) 쥐 혈액, FTA 0.5 mm 디스크; (D) 쥐 꼬리 추출물, NaOH 추출을 통해 신속한 SNP 분석이 가능합니다.
그림 8. 고효율 4-plex 성능.KAPA PROBE FORCE 및 세 가지 경쟁적 마스터 믹스를 사용한 다중 분석법으로 네 가지 표적 유전자를 증폭하였다. 100 pg 마우스 gDNA를 대상으로 (A) Isg20 (FAM/BHQ-1), (B) F13a1 (CAL Fluor Orange 560), (C) Camta1 (Quasar 670), (D) Ube20 (Quasar 705) 유전자를 표적으로 100 pg 마우스 gDNA를 증폭하였다. 500 nM 프라이머와 110 nM 프로브를 사용하였으며, 다음과 같은 사이클링 조건을 적용하였다: 95°C 30초 후, 95°C 3초 및 60°C 30초로 구성된 50회 사이클.
KAPA SYBR® FAST 원스텝 qRT-PCR 키트
KAPA SYBR® FAST 원스텝 qRT-PCR 키트는 엄격한 qRT-PCR 반응 조건에서 최적의 성능을 발휘하도록 설계되어, 민감도, 특이도, 반응 효율 및 형광도에서 획기적인 개선을 보여줍니다. 본 키트는 편리한 qRT-PCR 프로토콜로 실험 변동성과 오염을 줄이면서 신속한 원스텝, 원튜브 RNA 정량화를 위해 최적화되었습니다. 키트에는 M-MuLV 역전사효소, RNase 억제제 및 유도 진화를 통해 개발된 새로운 DNA 중합효소가 포함되어 있습니다.
KAPA SYBR® FAST 원스텝 qRT-PCR 키트는 다양한 응용 분야에 적합하며 다음을 포함합니다:
- 단일염기다형성(SNP) 유전자형 분석
- 유전자 발현 분석
- 마이크로어레이 검증
- 유전자 노크다운 검증
- RNAi 및 miRNA 연구
신호 및 반응 효율 향상
- 정확한 qPCR을 위한 지속적으로 높은 증폭 효율
- 더 높은 형광도, 더 빠른 Cq 값 및 향상된 반응 효율
그림 9. RRMI 유전자인간 태반에서 분리된 RNA(20 μL 반응당 100 ng ~ 10 pg)의 10배 희석 시리즈로부터 증폭된 (94 bp, 45.7% GC). KAPA SYBR® FAST One-Step qRT-PCR Kit는 더 빠른 Cq 값, 더 높은 형광도 및 최적의 반응 효율을 보여줍니다.
다양한 표적 길이에 걸쳐 증폭
- 증폭체 크기에 관계없이 안정적인 성능
MS2 박테리오파지 RNA 표적은 길이가 증가함에 따라 20 μL 반응당 0.8 pg로 증폭되었습니다. KAPA SYBR® FAST One-Step qRT-PCR Kit는 모든 증폭산물 길이에서 높은 성능을 유지했습니다.
감도와 재현성 향상
- 다양한 RNA 템플릿 농도 범위에서 정확한 분석
그림 11.상업용 MS2 박테리오파지 RNA의 10배 희석 시리즈(20 μL 반응당 80 pg ~ 0.8 fg)에서 6회 반복 증폭된 279 bp 단편. 데이터당 6회 반복 모두에 대해 계산된 반응 효율 95%.
자세한 내용은 KAPA SYBR® FAST 원스텝 qRT-PCR 키트 FAQ를 참조하십시오.
KAPA HRM FAST
DNA 염기서열 변이의 정확한 검출
고해상도 용융(HRM) 분석은 핵산 서열의 유전적 돌연변이 또는 변이를 빠르고 대량으로 PCR 후 분석하는 기술입니다. KAPA HRM FAST 마스터 믹스는 서열 변이 간 최대 분별력을 위해 최적화된 EvaGreen® 포화 염료와 함께 새로운 DNA 중합효소 및 완충 시스템을 포함합니다.
KAPA HRM FAST 키트는 다음을 제공합니다:
- 단일 염기 다형성(SNP) 유전자형 분석
- 돌연변이 발견(유전자 스캐닝)
- 이형접합성 스크리닝
- DNA 지문 분석
- DNA 메틸화 분석
IV형 SNP의 정확한 검출
- 경쟁사 제품이 실패할 때도 95% 검출률 보장*
- 반응 시간 단축
그림 12.*A) 제4형 단일염기다형성(SNP) rs641805는 디하이드로피리미딘 탈수소효소(DPD) 유전자의 인트론에 위치한다. 반응에는 2.5 mM MgCl₂, 각 프라이머 0.2 μM 및 인간 게놈 DNA 10 ng이 포함되었다. PCR 및 HRM은 5초 변성(95°C) 및 20초 어닐링/연장(60°C)을 포함한 빠른 2단계 사이클링 프로토콜(40회 사이클)을 사용하여 수행되었습니다.
*B) 제4형 SNP rs641805는 디하이드로피리미딘 탈수소효소(DPD) 유전자의 인트론에 위치합니다. 반응에는 2.5 mM MgCl2, 각 프라이머 0.2 μM 및 10 ng의 인간 게놈 DNA도 포함되었습니다. PCR 및 HRM은 5초 변성(95 °C) 및 20초 어닐링/연장(60 °C)을 포함한 빠른 2단계 사이클링 프로토콜(40회 사이클)을 사용하여 수행되었습니다. 제조사의 지침에 따라 동일한 템플릿 DNA 샘플과 함께 ABI MeltDoctor HRM Master Mix를 사용했습니다.
서열 변이체의 차이를 극대화
- 융해 행동의 차이를 극대화하도록 설계됨
- 향상된 감도
서열 변이체의 차이를 극대화
- 융해 행동의 차이를 극대화하도록 설계됨
- 감도 향상
세포에서 SNP까지 신속하게 진행
- KAPA Express Extract Kit와 함께 사용할 경우 2시간 이내에 추출, 증폭 및 HRM 수행 가능
그림 14.36명의 개인으로부터 채취한 구강 내막 면봉을 사용하여 KAPA Express Extract DNA 추출 키트(권장 프로토콜에 따라)로 DNA 추출물을 준비하였다. 추출된 DNA는 2.5 mM MgCl₂ 및 각 프라이머 0.2 μM을 포함하는 반응에 직접 사용되었습니다. PCR 및 고해상도 멜팅 분석(HRM)은 5초 변성(95°C) 및 30초 어닐링/연장(60°C)을 포함한 빠른 2단계 사이클링 프로토콜(45회 사이클)로 수행되었습니다.
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