Kit de síntesis de sonda DIG para PCR

La función de cada lote del kit de síntesis de sonda DIG para PCR se prueba en la PCR. Los productos de amplificación se analizan utilizando la técnica Southern en el genoma.
En las condiciones de PCR como las descritas en el prospecto de este envase, la reacción de control genera un producto de amplificación de 442 pares de bases. Debido a las múltiples incorporaciones de DIG-dUTP durante el proceso de PCR, el peso molecular de los productos de la PCR aumenta significativamente en comparación con el producto no marcado de PCR. Después de la hibridación del producto de la PCR con 10μg de ADN genómico humano seguida de detección quimioluminiscente se detecta un patrón de fragmento específico.

Las sondas de ADN marcadas con digoxigenina (DIG) producidas a partir del kit de síntesis de sondas DIG para PCR son idóneas para la detección de genes de pocas copias o de copia única de ARNm raros en las técnicas Southern y northern. Las sondas de ADN marcadas con DIG también se han utilizado para marcar el ADN durante la hibridación in situ.
La concentración de la mezcla de dUTP-nucleótido suministrada puede ajustarse según la longitud de la sonda. La eficacia del marcaje puede determinarse rápidamente en un gel de agarosa.
Es posible deshibridar y producir nuevas sondas múltiples veces de las membranas si se sigue el protocolo del prospecto del envase.
Una reacción de marcaje para PCR (50 μl) producirá normalmente suficiente sonda para una disolución de hibridación de 20 ml. El kit puede utilizarse para 25 reacciones (50 μl).

El kit de síntesis de sonda de DIG para PCR contiene una formulación de digoxigenina lábil a álcalis (DIG)-11trifosfato de desoxiuridina (dUTP). Este kit está indicado para la generación eficiente de sondas de ADN marcadas con DIG que son muy sensibles en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Las sondas se marcan con DIG-11dUTP (lábil a álcalis) por el método de la PCR. La proporción de DIG-dUTP:dTTP es de 1:2.
El kit de síntesis de sonda de DIG para PCR contiene la mezcla de ADN polimerasa de alta fidelidad Expand. Esta robusta mezcla enzimática con actividad de verificación y corrección polimerizará sondas de 40 pb de longitud hasta 5 kb utilizando como plantilla un plásmido de ADN de 10 pg y10 ng de ADN genómico. Las sondas marcadas con DIG son estables durante un año.

1 kit que contiene 6 componentes.