Ribonucleasa A from bovine pancreas

La ARNasa A es una endorribonucleasa que ataca al fosfato 3′ OH de un nucleótido de pirimidina. Se escindirá la secuencia pG-pG-pC-pA-pG para dar pG-pG-pCp y A-pG. La mayor actividad la exhibe con ARN monocatenario.

La ARNasa, ribonucleasa A, es una endorribonucleasa que escinde los enlaces fosfodiéster del ARN monocatenario después de nucleótidos de pirimidina. Ataca el extremo 3′ fosfato (por ejemplo, el pG-pG-pC-pA-pG será escindido para dar pG-pG-pCp y A-pG). La mayor actividad la exhibe con ARN monocatenario. La ARNasa A es un polipéptido monocatenario que contiene cuatro puentes bisulfuro. Al contrario que la ARNasa B, no es una glucoproteína. Las ribonucleasas no hidrolizan el ADN porque el ADN carece de los grupos 2′-OH esenciales para la formación de los intermediarios cíclicos. La ARNasa A también puede hidrolizar el ARN de las muestras proteicas. La ARNasa A puede ser inhibida por alquilación de la His12 o la His119 y activada por sales de potasio y de sodio. La RNAasa se inhibe en presencia de iones de los metales pesados. La ARNasa también es inhibida competitivamente por el ADN.

La ARNasa A es una cadena polipeptídica única que contiene 124 aminoácidos unidos por cuatro puentes disulfuro. Al contrario que la ARNasa B, la ARNasa A no es una glucoproteína. La ARNasa A puede ser inhibida por alquilación de la His¹² o His¹¹⁹, que están presentes en el sitio activo de la enzima. Entre los activadores de la ARNasa A se cuentan las sales de potasio y de sodio.

La ribonucleasa A del páncreas bovino se ha utilizado:

• para purificación del ADN plasmídico
• para digerir y evitar la tinción del ARN de doble cadena durante la tinción de núcleos
• en la detección mediante inmunoperoxidasa e inmunofluorescencia
• para tratar las células antes de la citometría de flujo
• como componente del tampón de poshibridación para lavar los cortes de tejido FFPE después de la hibridación in situ
• para tratar las células durante la preparación de los extractos proteicos de la membrana externa (OMP)
• Ensayos de protección de ARNasa
• Eliminación del ARN unido de manera inespecífica
• Análisis de las secuencias de ARN
• Hidrólisis del ARN contenido en las muestras proteicas

Nuestra muy estable ribonucleasa A, ARNasa A, es idónea para la eliminación del ARN, la secuenciación del ARN y la purificación del ADN.

Proteína determinada mediante E.

Entre los activadores de la ARNasa A se cuentan las sales de potasio y de sodio. La ARNasa A puede inhibirse por alquilación de la His12 o la His119.

Una aplicación principal de la ARNasa A es eliminar el ARN de las preparaciones de ADN plasmídico. Para esta aplicación, se utiliza ADNasa exenta de ARNasa A a una concentración final de 10 μg/ml.

No es necesario hervir las disoluciones de reserva de esta ARNasa A para inactivar la ADNasa residual. Además puede provocar precipitación de la ARNasa y posible pérdida de actividad enzimática Si una disolución de ARNasa A se calienta a un pH neutro, se producirá precipitación. Cuando se calienta a un pH inferior, puede ocurrir algo de precipitación debido a las impurezas proteicas presentes.