製薬業界におけるマイコプラズマ検査
マイコプラズマ汚染は、ライフサイエンス研究や製薬業界における多くの細胞培養システムにとって、広範かつ繰り返し発生する問題です。マイコプラズマは、濁りなどの典型的な細菌汚染の兆候を示さずに、培養培地内で高力価まで増殖することがあります。培養細胞に対するその影響としては、代謝の変化、増殖の遅延、染色体異常などが挙げられます。 要するに、マイコプラズマ汚染は、影響を受けた細胞株のデータやライフサイエンス研究の結果の妥当性を損なう。このため、マイコプラズマ検査、ひいては汚染のない細胞培養の維持は、細胞を用いた研究や、消費者の健康が主要な関心事となる製品の製造において極めて重要である。
注目のカテゴリー
製薬製造向けの高度な環境モニタリングおよび無菌プロセスシミュレーションソリューションをご紹介します。クリーンルーム、アイソレーター、RABS向けの専用ツールや培地を活用し、GMP準拠を確実に実現します。
バイオセーフティ試験サービス
mAb、細胞・遺伝子治療、およびワクチン原料を調査し、下流工程において致命的な失敗を引き起こす可能性のある外来性病原体や予期せぬ結果がないことを確認するためのバイオセーフティ試験サービス。これには、マイコプラズマ検査が含まれます。
マイコプラズマ菌について
マイコプラズマは、既知の細菌の中で最も小さい部類に属し、孔径0.2 µmのフィルターを通過することができます。これらの微生物は、好気条件下または通性嫌気条件下で増殖します。
マイコプラズマは寄生性または腐生性のいずれかです。例えば、M. pneumoniae（マイコプラズマ・ニューモニアエ）など、いくつかの種は病原性があり、ヒトに肺炎やその他の呼吸器疾患を引き起こします。M. genitalium（マイコプラズマ・ジェニタリウム）は、骨盤内炎症性疾患に関与していると考えられています。細胞壁を持たない細菌であるため、マイコプラズマは、この構造に作用するペニシリンやその他の抗生物質には感受性がありません。 細胞質膜を安定化させるために、ほとんどのマイコプラズマはステロールを必要とし、これを環境から取り込む。通常、動物宿主からのコレステロールとして摂取される。また、多くのマイコプラズマ株は、その他の様々な抗生物質に対しても耐性を示す。
マイコプラズマ汚染の原因
実験室や製造現場におけるマイコプラズマ汚染の発生源を管理することは、非常に困難です。一部の種はヒトの皮膚に存在しており、不適切な無菌操作によって培養物に混入する可能性があります。さらに、マイコプラズマは、胎児牛血清などの汚染された培地添加物を通じて、あるいは最も一般的なケースとして、他の汚染された細胞培養物からの伝播によって混入する可能性があります。 一度細胞培養にマイコプラズマが混入すると、培養操作の際に発生するエアロゾルや微粒子を介して、これらの微生物は急速に拡散し、実験室の他のエリアを汚染する可能性があります。適切な無菌操作規範を厳格に遵守することが重要であり、製造エリアにおけるマイコプラズマ汚染を効果的に管理するためには、培養物の定期的な検査を強く推奨します。
製薬業界でマイコプラズマ検査を行う理由とは？
ワクチン製造に真核細胞を用いるバイオ医薬品施設では、細胞バンクやウイルスシードロット、さらにはバルクワクチンについて、マイコプラズマによる汚染の有無を検査する必要があります。この細菌属に属する種は真核細胞に感染し、その増殖や代謝を阻害します。マイコプラズマがワクチン製造に干渉すると、タンパク質の品質や収量に影響を与えるだけでなく、さらに重要なこととして、最終的なワクチン製品を投与された患者に副作用を引き起こす可能性があります。
バイオリアクターのマイコプラズマ汚染は、製造プロセスの早期段階で特定されない限り、時間、材料、収益の大幅な損失につながる可能性があります。厳格な検査手順がなければ、バイオ医薬品製造バッチのマイコプラズマ汚染を発見することは極めて困難です。なぜなら、マイコプラズマの存在は、一般的に培養液のpH変化や目に見える濁りを引き起こさないからです。 薬典に規定されたマイコプラズマ検査法では、検出のために培養法と指標細胞法の両方が用いられます。分析に使用する培地が2種類のみの場合、FREY培地とFRIIS培地を組み合わせて使用することが推奨されます。
マイコプラズマ検査法
品質管理の各段階で、バイオ医薬品、ワクチン、細胞培養物、およびウイルス培養物についてマイコプラズマ検査を行うことが重要です。最も一般的な3つの検査方法は以下の通りです。
- マイコプラズマ培養法：マイコプラズマ用に最適化された細菌培養培地に試験サンプルを接種する
- DNA染色法：マイコプラズマの核をHoechstまたはDAPIで対比染色し、蛍光顕微鏡を用いて画像化する
- PCR（ポリメラーゼ連鎖反応）：検体にマイコプラズマが存在する場合、その細菌DNAを増幅する
EP 2.6.7 および USP 63 に準拠したマイコプラズマ検出ワークフロー
* 接種後の各日、各液体培地から0.2 mLを採取し、各固体培地のプレートに少なくとも1枚ずつ接種して継代培養を行う。この手順を、試験の6日目から8日目の間、13日目から15日目の間、および19日目から21日目の間にそれぞれ繰り返す。液体培地は2～3日ごとに観察し、変色が見られた場合は継代培養を行う。
注：さらに、各固体培地および液体培地につき、陽性対照1つおよび陰性対照1つを用意し、14日間の培養を行う必要がある。
薬典に基づくマイコプラズマ検出用即用型培地
当社は、欧州薬局方第6.1版（2.6.7.）および米国薬局方第35版（63）に準拠したマイコプラズマ検出に必要な、即用型の液体および固体培養培地の包括的な製品ラインナップを提供しています。当社の即用型マイコプラズマ培養培地は、追加の準備工程を一切必要とせず、ロットごとの分析証明書により、安定した製品品質と完全なトレーサビリティを保証します。
マイコプラズマ用培地は、その成分の性質上、微生物学的品質管理用の他のほとんどの培地に比べて保存期間がはるかに短いのが一般的です。 当社の即用型Friis、Frey、Hayflick液体および固体培地の保存期間は、寒天プレートで4ヶ月、ブロスで6ヶ月へと延長されました。保存期間が長い当社の即用型培地フルラインナップをご活用いただき、マイコプラズマ検査をより容易に行ってください。
関連記事
- Cell culture protocol for testing cell lines for mycoplasma contamination using indirect DNA staining using Hoechst 33342.
- すべて表示 (1)
その他の記事を見る
ご用件について
ご質問がございましたら、カスタマーサポートへお問い合わせ
ください。 または、カスタマーサービスチームまでご連絡ください：
メール：custserv@sial.com
またはお電話：+1 (800) 244-1173
その他のサポート
- クロマトグラム検索
「クロマトグラム検索」機能を使用して、サンプル中の未知の化合物を同定してください。
- 計算ツール・アプリ
ウェブツールボックス－分析化学、ライフサイエンス、化学合成および材料科学のためのサイエンスリサーチツールとリソース
- カスタマーサポートへのご依頼
お問い合わせページでは、製品のお問い合わせや、注文や納期、お取引やアカウント、ウェブサイトに関するお問い合わせをお申込みいただけます。
- よくある質問
当社の製品やサービスに関するよくある質問については、よくある質問（FAQ）をご覧ください。