DIGニックトランスレーションミックス

DIG-Nick Translation Mixはニックトランスレーションに便利な酵素とヌクレオチドの混合物です。ニックトランスレーション法ではDNaseとDNAポリメラーゼを組み合わせて、DNAらせんの片方の鎖に切れ目を入れます。次に、ポリメラーゼによる読み取りの際、ラベルしたヌクレオチドが取り込まれるか、または切れ目を入れた部位が「校正」されます。この方法では、大きなプラスミド、コスミド、PCRフラグメントのどれもが使用でき、DNAは直線状でもスーパーコイルでも使えます。標準の90分反応で各テンプレートから得られる結果は一貫性があり、得られるプローブの平均長は200～500塩基対です。ジゴキシゲニン(DIG)-11-デオキシウリジン三リン酸（dUTP）とデオキシチミジン三リン酸（dTTP）とのモル比は、新たに合成されたDNAの20～25番目のヌクレオチドがDIGで修飾されるように調整されています。DNA中のこのハプテン密度で、免疫学的検出反応において最も高い感度が得られます。

メルクは、グリーン・ケミストリーの12原則の1つ以上に則った、より環境に配慮した製品（グリーン代替品）をお客様にお届けできるよう最善の努力をします。この製品はさらに安全な化学品として設計されます。  DIGシステムは、核酸のラベリングと検出に放射能を使用することに代わる高感度で費用対効果の高い手段として確立されました。DIGシステムの汎用性を証明する入手可能な出版物は数多くあります。そのため、放射性ラベリングの使用は、もはやハイブリダイゼーションのDNAラベリングの唯一の選択肢ではありません。

DIG-ニックトランスレーションミックスは、ジゴキシゲニン-11-dUTPで標識したin situハイブリダイゼーション用の高感度プローブの作製に用いられています。
注：このミックスはフィルターハイブリダイゼーション技術にも使用可能ですが、高感度のフィルターハイブリダイゼーション用プローブの作製にはRoche Applied Science社のDIG-High Primeをお勧めします。
他のハプテンやフルオロフォアを用いたin situプローブの非放射性ラベリングには、Roche Applied Science社よりビオチン-ニックトランスレーションミックスおよびニックトランスレーションミックス（ヌクレオチドなし）が販売されています。

熱失活：1 μL 0.5M EDTA（pH 8.0）を添加し、65℃で10分間加熱することにより反応を停止させます。

ニックトランスレーション法は、MgCl₂存在下の低い酵素濃度において、DNAにランダムに分散したニックを導入するDNase Iの性能に基づいています。
大腸菌DNAポリメラーゼIは、プライマーとしてニックの3′-OH末端を用いて、5′→3′方向に、未変性の鎖に対して相補的なDNAを合成します。DNAポリメラーゼIの5′→3′エキソヌクレオチド分解活性により、同時に合成方向にヌクレオチドが除去されます。除去されたヌクレオチドは、ポリメラーゼ活性により、同位体ラベルした又はハプテンラベルしたデオキシリボヌクレオシド三リン酸に順次置き換えられます。このため、低温（＋15℃）において、反応液中の非ラベルDNAは新たに合成されたラベルDNAに置き換えられます。

1バイアルに50％グリセロール（v/v）中5倍濃度安定化反応バッファー及びDNAポリメラーゼI、DNase I、0.25 mM dATP、0.25 mM dCTP、0.25 mM dGTP、0.17 mM dTTP、0.08 mM DIG-11-dUTP（アルカリ安定性）。
アッセイ時間：100分間　
サンプル材料：スーパーコイルDNA及び線状プラスミドDNA、スーパーコイルDNA及び線状コスミドDNA、精製PCR産物。
注：ニックトランスレーションの前にテンプレートを変性する必要はありません。

ドットスポットアッセイにより性能試験済み。

ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。