コラゲナーゼ Clostridium histolyticum由来

コラゲナーゼは、終端糖化産物（AGE）の研究のための動脈組織の調製に使用されています。また、ヒト腫瘍、マウス腎臓、ヒト脳、肺上皮およびその他の多数の組織の脱凝集のために他のプロテアーゼとともに使用されています。さらに、肝臓および腎臓灌流研究、膵臓の分解、非実質肝細胞の分離にも使用されます。本酵素は、肝細胞の遊離のために約1 mg/mLの濃度でテストされています（各ラット肝臓の合計容量100 mL）。

コラゲナーゼは、モル酵素あたり 4 グラム原子カルシウムによって活性化されます。 本製品は、エチレングリコール-ビス(β-アミノエチルエーテル) - N, N, N′,N′-四酢酸、β-メルカプトエタノール、グルタチオン、チオグリコール酸、および 8-ヒドロキシキノリンによって阻害されます。

組織からの細胞の効果的な放出には、コラゲナーゼ酵素および中性プロテアーゼの作用が必要です。コラゲナーゼはモル酵素あたり4グラム原子カルシウム（Ca²⁺）によって活性化されます。培養ろ液には、68～130 kDaの分子量範囲の少なくとも7種の異なるプロテアーゼが含まれると考えられています。至適pHは6.3～8.8です。通常、本酵素は組織サンプル中の結合成分を消化して個々の細胞を遊離させるために使用されます。コラゲナーゼ処理により、一部の細胞が死滅することがあります。通常、消化には0.1～5 mg/mLの濃度が使用されます。反応時間は15分～数時間で、過剰な細胞死を引き起こすことなく、十分な細胞の解離を得ることができます。カルシウムおよびBSAを含むKrebs Ringer緩衝液が好ましく、活性にはZn²⁺が必要です。

溶液は通常、37℃で、50 mM TES、0.36 mM 塩化カルシウムを含むTESCA緩衝液（pH 7.4）により、1～2 mg/mLの濃度で調製されます。

1 コラーゲン消化単位（CDU）は、ウシアキレス腱由来コラーゲンからペプチドを遊離し、カルシウムイオン存在下、pH 7.4、37°C、5 時間のニンヒドリン呈色における、1.0 umol のロイシンに相当します。1 FALGPA 加水分解単位は、25°Cで、1 分間あたりに、1.0 umol の furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala を加水分解します。1 中性プロテアーゼ単位は、pH 7.5、37°Cでカゼインを加水分解し、5 時間あたり1.0 umol のチロシンに相当する色を生成します。1 クロストリパイン単位は、DTT の存在下、pH 7.6、25°Cで、1 分間あたり　1.0 umol　の BAEE を加水分解します。

供給後、本製品は－20℃で1年間安定です。37℃、50℃、－20℃で30日間、FALGPAまたはプロテアーゼ活性の低下はありません。粗コラゲナーゼの溶液は、アリコートして（10 mg/mL）急速凍結し、－20℃で保存すると安定です。それ以上凍結融解を繰り返すと、溶液は劣化します。本製品は、氷上で7時間以上、活性の100％を保持します。