FluoroTag^™ FITC標識キット

Flourotag FITC接合キットは、フロー・サイトメトリーを用いた免疫組織化学と免疫細胞化学に使用できます。また、ペプチドホルモン、サイトカイン、成長因子およびタンパク質とのFITC接合にも使用されます。

抗体を容易にFITC標識するためのキットです。フルオレセインイソチオシアネ-ト(FITC)アイソマ-1は、標識した際にも量子効率が高く安定であるため、広く用いられている蛍光色素です。FITCは黄-橙色で吸収極大は495nmです。励起されると黄-緑色、発光極大525nmとなります。タンパク質やペプチドのフリ-アミノ基と安定なチオウレア結合を形成することで標識します。抗体、レクチン、ホルモン、成長因子等をFITC標識し、免疫組織染色、フロ-サイトメトリ-等幅広いアプリケ-ションに適用可能です。プロトコ-ルは抗体の標識に最適化されていますが、他のタンパク質用にも利用できます。

• 小スケール(1 mg)、大スケール(5 mg)両方の標識が可能です。
• DMFを使用しない、水溶系のプロトコールです。
• 過剰なFITCをゲル濾過により速やかに除去します。
• 標識からF/P比の算出まで行える完全なプロトコールです。
• 試薬量は1回5 mgのタンパク質で最低5回の標識が可能であり、スケールアップ前にF/P比を最適化することができます。
• アプリケーションとプロトコール記載。

手順
1. タンパク質およびFITCを炭酸-重炭酸バッファーに溶解します。
2. 攪拌しながらタンパク質にFITCをゆっくりと添加してください。アルミ箔でカバーし、室温で2時間攪拌してください。
3. G-25カラムで標識体とフリーのFITCを分離し、フラクションを回収してください。
4. 標識体を含むフラクションをプールします。
5. 分光測定により標識体のF/P比を決定してください。
6. 1% BSAおよび0.1%アジ化ナトリウムで安定化し、 0～5°Cで保存してください。

FluoroTag is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC