コンカナバリンA Canavalia ensiformis（タチナタマメ）由来

一般的なウェスタンブロットプロトコール：

• 糖タンパク質サンプルサイズ：500 ng
• レクチン濃度：0.1 ug/mL

1. レーンあたり500 ngの糖タンパク質をサンプルとして添加します
2. 4～20% Bis-Tris SDSページゲル電気泳動を実施します
3. ゲルをPVDFメンブレンに転写します
4. RIPAバッファー（R0278 Sigma）でRTで1時間メンブレンをブロックします
5. RTで2時間、RIPAバッファーで0.1 ug/mLのHRPレクチンをインキュベートします
6. 25 mL RIPAバッファーで膜を5 x 5分間洗浄します
7. 化学発光基質（CPS1-120）を使用して検出します

適切なペルオキシダ-ゼの基質と共に用い、α-Ｄ-マンノ-ス, α-Ｄ-グルコ-スを含む糖タンパク質を検出します。

Con Aは、血液型に特異的ではないものの、末端のα-D-マンノシル残基およびα-D-グリコシル残基に対する親和性を有しています。活性化には、Ca²⁺イオンおよびMn²⁺イオンが必要です。Con Aは、pH 5.6以下で解離して二量体になります。pH 5.8とpH 7.0の間では、Con Aは四量体として存在し、pH 7.0を超えると、高次凝集体が形成されます。Con Aは、その凝集度に依存した分裂促進活性を示します。スクシニル化されると、高活性な二量体となり、pH 5.6を超えても二量体は維持されます。

包装サイズはタンパク質含量を基準にしています。

凍結乾燥粉末 (トリス-クエン酸緩衝塩, 微量のカルシウム・マグネシウム含有)

Wilson, Nakaneの方法によりペルオキシダ-ゼtype VI(P8375)から調製しているため、結合を促進し、Con Aとペルオキシダ-ゼの糖残基間の相互作用を防ぎます。

凝集活性は、1 mg/mL溶液をPBS(pH 6.8、Ca²⁺およびMn²⁺を含有)で段階希釈して測定し、μg/mLの単位で表します。凝集活性は、25°Cで1時間インキュベートした場合、ヒト赤血球の2%懸濁液を凝集させる最低濃度で示されます。

1 unitは、pH 6.0、20°C、20秒間に、1mgのプルプロガリンをピロガロールから生成する酵素量です。