アルカリホスファターゼ from bovine intestinal mucosa

ウシの腸管内のアルカリホスファターゼは二量体で、膜由来の糖タンパク質です。少なくとも3つのアイソフォームが存在し、通常は単量体あたり2つのN結合型グリカンと1つ以上のO結合型グリカンを有します。

ウシの腸管内のアルカリホスファターゼは二量体で、膜由来の糖タンパク質です。少なくとも3つのアイソフォームが存在し、通常は単量体あたり2つのN結合型グリカンと1つ以上のO結合型グリカンを有します。2　本酵素は、作用するために亜鉛、並びにマグネシウム又はカルシウムのニ価イオンを必要とします。

アルカリホスファターゼは、脱リン酸化カゼインなどのタンパク質に用いることができます。アルカリホスファターゼを用いて、DNAまたはRNAの5'-末端を脱リン酸化し、セルフライゲーションを予防することもできます。DNAまたはRNAは、アルカリホスファターゼによる脱リン酸化後に(T4ポリヌクレオチドキナーゼにより)放射性同位元素標識リン酸をタグとして融合することもできます。

アルカリホスファターゼを使用して抗体とその他のタンパク質に結合し、ELISA、ウエスタンブロット、および組織化学的検出を行います。 カゼインなどのタンパク質と核酸の脱りん酸化に日常的に使用されます。 高感度が求められる場合はタンパク質の標識化に使用できます。 アルカリホスファターゼをDNAまたはRNAの5′末端脱リン酸化に使用して、セルフライゲーションも防止できます。また、DNA又はRNAは、アルカリホスファターゼを用いた脱リン酸化後に、放射標識されたリン酸（T4ポリヌクレオチドキナーゼによって）でタグを付けることができます。 P6774は、脳ライセートの調製に使用されています。

シグマの本酵素は、AP-BGG（アルカリホスファターゼ‐ウシガンマグロブリン）抱合体を調製するのに使用されています。これは、免疫アッセイでヒツジ抗ウサギIgGおよびヒツジ抗ウサギIgMに結合します。また、1つの組織切片内で3つの異なる細胞内Ig決定基を同時検出するための、HRPとの二重酵素抱合体の調製にも使用されています。

抗体及びタンパク質接合に対して推奨される高い比活性グレードを有します。

ウシ腸粘膜由来のアルカリ・ホスファターゼは7.5～9.5のpH範囲で最も安定です。本酵素はアルコール、アミン、ピロりん酸、およびフェノール類のりん酸エステルに広い特異性をもち、その活性には亜鉛、マグネシウムまたは2価のカルシウム・イオンが必要です。

本酵素は、約12%の炭水化物(ヘキソース6%とその他の中性糖6%)を含む糖タンパク質です。アルカリ・ホスファターゼの各分子は4つの亜鉛原子と4つのジスルフィド架橋を含みます。アルカリ・ホスファターゼの活性はマグネシウム存在下で最大に達します。p-ニトロフェニルリン酸、フェニルリン酸、フェノールフタレインリン酸、α-グリセロールリン酸、β-グリセロールリン酸、2-ホスホリルグリセリン酸、トリオースリン酸、グルコース-6-リン酸、グルコース-1-リン酸、フルクトース-1-リン酸、フルクトース-6-リン酸、アデノシン5-リン酸、アデノシン3-リン酸、ホスホエノールピルビン酸、及びβ-ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸などのリン酸モノエステルの加水分解を触媒します。ヒ素塩、システイン、ヨウ素、無機りん酸塩、ピロりん酸塩、ジイソプロピルりん酸、トリフェニルりん酸、ジイソプロピル・フルオロりん酸、およびL-フェニルアラニンは、アルカリ・ホスファターゼの強力な阻害物質の一部です。

本酵素はアルコール、アミン、ピロリン酸、及びフェノールのリン酸エステルに対して広い特異性を有しています。タンパク質及び核酸を脱リン酸化するために、日常的に使用されます。

5 mM MgCl₂, 0.2 mM ZnCl₂, 30 mMトリエタノ-ルアミンを含有する3.0 M NaCl(pH 7.6)に溶解された溶液

アフィニティ-精製

タンパク質はBiuret法で測定。

容量は、DEA unitに基づいています。

1 DEAユニットは、pH 9.8、37°C、1分間に、1 μmolの4-ニトロフェニルリン酸を加水分解する酵素量です(1 グリシンユニットは約3 DEAユニットに相当します)。