GenElute^™ 哺乳動物用total RNAミニプレップキット

ジーンエリュート^™哺乳動物用全RNAミニプレップキットは、細胞および組織から全RNAを抽出するのに使用されています。

精製RNAは、逆転写とPCR、標識化とマイクロアレイ分析、およびその他の一般的な用途に使用できる状態になっています。tRNA、5S rRNA、および5.8S rRNAなどの200ヌクレオチドより短いRNAはこのキットで使用される条件下では効率的に回収されません。

グアニジンチオシアネ-トと2-メルカプトエタノ-ル中でサンプルを溶解・ホモジナイズし、RNAをリリ-スしてリボヌクレア-ゼを失活させます。濾過カラムを通してライセ-トを遠心し、細胞残渣を除去してDNAを切断します。次に、ろ液を高結合シリカカラムにアプライしてtotal RNAを結合させた後、洗浄と溶出を行います。100 μLの水で1 prepあたり最高150 μgのtotal RNAを回収できます。精製したRNAはノ-ザンブロット(Fig. 1)、RT-PCR(Fig. 2)、その他の一般的な用途にそのまま使用できます。

ジーンエリュート哺乳動物用全RNAミニプレップキットは、シリカ膜技術を使いやすいスピンカラムフォーマットと組み合わせ、仔品質の全RNAを調製する迅速結合、洗浄、溶出方法です。

シグマのジーンエリュート哺乳動物用全RNAミニプレップキットは、哺乳類の細胞および組織から全RNAを単離する簡単、迅速でコスト効果のある方法を提供します。細胞、組織、および線維組織にはプロトコルが提供されます。これらのプロトコルは細胞の溶解および崩壊条件で異なります。RNAがジーンエリュート バインディングカラム（Binding Column）に結合すると、精製手順はすべての出発材料について同一になります。線維組織の場合、効果的な細胞崩壊を確保するためこのキットをプロティナーゼK（カタログ番号P4850）と併せて使用してください。このキットは、シリカ系システムの長所をマイクロスピンフォーマットと結び付けます。そのため、塩化セシウム勾配、アルコール沈殿、およびフェノールやクロロホルムなどの有害な有機化合物の必要性が排除されます。細胞または組織はグアニジンチオシアネートを含有する緩衝液に溶解、均一化するので、高分子の完全な変性とRNアーゼの失活が確保されます。
溶解質を微量遠心チューブのシリカ膜に通した時、エタノールを添加するとRNAが結合します。汚染物質を洗浄除去後、RNAを50～100 µLの溶出液に溶出させます。最大150 µgの全RNAを30分未満で単離することができます。

微量のDNA汚染物質をすべて除去することが必要な場合は、さらにDNアーゼIで処理することをお勧めします。DNアーゼI消化は、オンカラムDNアーゼI消化セット（DNASE10およびDNASE70）を用いジーンエリュート バインディングカラムにRNAが結合している間に行うことができます。別法として、汚染DNAをより厳密に除去するため、RNA最終調製物を増幅グレードのDNアーゼI（AMPD1）で処理することができます。

メルクは、グリーン・ケミストリーの12原則の1つ以上に則った、より環境に配慮した製品（グリーン代替品）をお客様にお届けできるよう最善の努力をします。本製品は、DNA抽出を実施するためのフェノールおよびクロロホルムの標準的な使用と比較して、本質的に安全性が向上した化学的性質を有します。

GenElute^™ Mammalian Total RNA Purification Kitはシリカメンブレンテクノロジ-と、高品質total RNAを結合・洗浄・溶出する迅速で簡便なスピンカラムフォ-マットを組み合わせた方法をです。

詳細はwww.sigma-aldrich.com/totalrnaをご覧ください。

GenElute is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC