トリプシン ブタ膵臓由来

ペプチドをトリプシンで消化する場合、トリプシン:ペプチドについて約 1:100～1:20 の比を使用してください。この製品の代表的な用途は、培養表面から接着細胞を除去することです。細胞をその基材から除去するのに必要なトリプシンの濃度は、主に細胞型および培養の時期に依存します。トリプシンはまた、細胞培養期間中に細胞を再懸濁するために、タンパク質の消化に関するプロテオミクス研究において、およびさまざまなインゲル消化において使用されています†。さらなる応用例として、膜ベースの技術により結晶化を評価すること、ならびにタンパク質のフォールディング速度および収率は動的トラップの存在により制限を受ける可能性があることを試験において明確にすることが挙げられます。

トリプシンは、リシンおよびアルギニン残基の C 末端側でペプチドを開裂させます。この反応の加水分解速度は、酸性残基が切断部位のいずれかの側にある場合に低速化し、また加水分解は、プロリン残基が切断部位のカルボキシル側にある場合には停止します。トリプシン活性の至適 pH は 7～9 です。トリプシンは、アミノ酸の合成誘導体のエステル結合およびアミド結合を開裂させるように作用することも可能です。トリプシンが作用するペプチド結合を覆い隠すカルシウムおよびマグネシウムイオンを中和するキレート剤として、EDTA がトリプシン溶液に添加されます。これらのイオンを除去すると酵素活性が上昇します。

DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF、およびアプロチニン等を含むセリンプロテアーゼ阻害剤がトリプシンを阻害します。

1 mM HCl中の溶液はアリコート中で1年間安定であり、-20°Cで保管します。Ca²⁺が存在しても、トリプシンの自己分解が低減されて溶液中での安定性が維持されます。 トリプシンは2.0 M尿素、2.0 MグアニジンHCl、または0.1% (w/v) SDS中でもその活性の大部分を保持します。

1BAEE ユニットは、BAEE を基質として用いた場合、25°C、pH 7.6 で 1 分当たり 0.001 のΔA₂₅₃ を生成します。1BTEE ユニット = 320ATEE ユニット。反応容積 = 3.2 mL（光路長 1 cm）。

トリプシンは、Lys - lleペプチド結合で切断されたトリプシノーゲンからN末端のヘキサペプチドを取り除いて生成された、223のアミノ酸残基から成る単一ポリペプチド鎖から構成されます。 アミノ酸配列は6つのジスルフィド結合によって架橋されます。 これは天然型トリプシンであるベータ-トリプシンです。 ベータ-トリプシンは自己分解でき、Lys - Ser残基で切断するとアルファ-トリプシンになります。 トリプシンはセリンプロテアーゼファミリーのメンバーです。

本製品は、ハンクの均衡塩類溶液に25 mg/mLで溶解する凍結乾燥粉末です。