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Merck

10999644001

Roche

SP6/T7転写キット

sufficient for 2 x 20 assays (stadard transcription), kit of 1 (12 components), suitable for DNA sequencing, suitable for hybridization

別名:

放射活性を有するrna標識, 翻訳キットsp6/t7

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この商品について

UNSPSC Code:
41105803
NACRES:
NA.54

主要文書

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usage

sufficient for 2 x 20 assays (stadard transcription)

packaging

kit of 1 (12 components)

manufacturer/tradename

Roche

technique(s)

DNA sequencing: suitable, hybridization: suitable

storage temp.

−20°C

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General description

転写ベクターpSPT18またはpSPT19に挿入された試料材料
DNA。鋳型DNAは、所定の長さの転写物を得るための転写反応の前に、適切な制限酵素を用いて線形化しなければなりません。転写用鋳型として無傷プラスミドDNAを用いると、数種類の長さをもつプラスミドの異種転写物が得られます。

Application

SP6およびT7ポリメラーゼを使用したin vitro転写による、RNAの放射活性または非放射活性標識のための便利なキット。このキットは「冷」転写アッセイに用いることもできます。in vitro転写方法によって既知の長さの一本鎖RNAプローブが作り出され、さまざまなハイブリッド形成手法に用いることができます。SP6またはT7プロモーターの下流をクローニングしたDNA配列の
in vitro転写用。均一に標識されたRNAは、放射活性(例えば、32P、3H、35S)で標識された、または非放射活性(例えば、ジゴキシゲニンまたはビオチン)で標識されたリボヌクレオチドのいずれかを用いて、高効率(60～70%の取り込み率)で合成可能です。標識された転写物は、すべてのDNAおよびRNAハイブリッド形成手法に役立ち、染色体配列決定とS1ヌクレアーゼ研究にも用いられます。大量の高純度RNAがSP6/T7系を用いて合成可能です。これらの転写物はRNAプロセシング系に関する研究に用いられます。合成されたRNAは、卵母細胞に注入してからin vitroまたはin vivoで翻訳できます。所定のmRNAの転写は、「アンチセンス」RNAの導入によって阻害できます。合成されたmRNAのin vivo翻訳の効率は、キャップ構造の導入によって大幅に向上できます。

Biochem/physiol Actions

熱失活: 2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0)を添加して、および／または10分間65°Cに加熱して反応を停止します。
転写ベクターpSPT18またはpSPT19のポリリンカー部位にDNAを挿入します。これら2つのベクターは、ポリリンカー領域の配位のみ異なります。SP6およびT7 RNAポリメラーゼのプロモーターは、ポリリンカーのいずれかの側に位置します。SP6およびT7 RNAポリメラーゼは、それぞれSP6またはT7のプロモーター下流にあるDNA配列を特異的に転写します。ポリリンカー領域中のクローニングされた挿入物は、いずれかのプロモーターから転写されます。第1 DNA鎖はSP6 RNAポリメラーゼを用いて転写でき、逆鎖はT7 RNAポリメラーゼを用いて転写できます。同じDNAをpSPT18とpSPT19の両方に逆方向に挿入し、いずれかのRNAポリメラーゼのみで転写しても第1鎖と逆鎖を転写できます。SP6およびT7 RNAポリメラーゼは、クローニングされたDNAを鋳型として用い、Mg2+とリボヌクレオシド三りん酸の存在下で相補的RNAを合成します。スペルミジンは酵素活性を刺激します。特異的に標識された転写物は、放射活性(例えば、32P、3H、35S)または非放射活性(例えば、ジゴキシゲニンまたはビオチン)で標識されたリボヌクレオチド三りん酸を用いて得られます。

Packaging

1キットに12構成要素が含まれています。

Preparation Note

標準溶液: 標準標識アッセイ
ATP、GTP、UTP混合物
溶液4、溶液6および溶液7の1:1:1混合物を作ってATP、GTP、UTP混合物を調製します。

ジゴキシゲニン-11-UTPを用いた転写アッセイ
ATP、GTP、CTP混合物1
ATP(バイアル4)、CTP(バイアル5)およびGTP(バイアル6)を1:1:1で混合します。
UTP/DIG-11-UTP混合物
ジゴキシゲニン-11-UTP (6 mM)とUTP(バイアル7)を1:1で混合し、混合物1に一部として加えます。

「冷」転写
ATP、GTP、CTP、UTP混合物
溶液をバイアル4、5、6および7に1:1:1:1の比で混ぜ合わせて、この混合物を調製します。

Other Notes

生命科学研究用途に限ります。診断措置において使用しないでください。

キットの構成要素のみ

製品番号
詳細
  • pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
  • pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
  • Control DNA, (pSPT18- and pSPT19-neo-DNA, cleaved with Eco RI) 0.5 mg/ml
  • ATP, in Tris buffer 10 mM
  • CTP, in Tris buffer 10 mM
  • GTP, in Tris buffer 10 mM
  • UTP, in Tris buffer 10 mM
  • Transcription Buffer 10x concentrated
  • DNase I, RNase free, in buffer with 50% glycerol
  • RNase Inhibitor, in buffer with 50% glycerol
  • SP6 RNA Polymerase, in buffer with 50% glycerol
  • T7 RNA Polymerase, in buffer with 50% glycerol
すべて表示 (12)

pictograms

Exclamation mark
GHS07

signalword

Warning

hcodes

H317,H319

Hazard Classifications

Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1

保管分類

12 - Non Combustible Liquids

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WGK 2

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Lot/Batch Number
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56167920
46828520
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