デオキシリボヌクレアーゼ I ウシ膵臓由来

[¹⁴C]DNA [¹⁴C]DNAを加水分解する能力について、SigmaのDNAse Iをヒト尿由来インターロイキン1阻害剤と比較しました。これは、フットプリント実験に使用する酵素の安定性を調べるために、139塩基対のHind III/Nci I制限酵素断片の切断にも使用されています。DNase Iは、薬物とタンパク質のDNAへの結合を研究するためのフットプリント剤として広く使用されています。

ウシ膵臓由来のデオキシリボヌクレアーゼIは、ウシ膵臓から高活性のRNase、DNase、コレステロールエステラーゼ、およびトリプシンを得るための新しいアプローチの研究に使用されています。また、ウシ膵臓由来のデオキシリボヌクレアーゼIも、コイ肝臓DNaseの単離およびさらなる特性解析の研究に使用されています。

タンパク質サンプルからDNAを除去する際に使用します。

DNase Iは、ピリミジンに隣接したホスホジエステル結合に作用して、末端5'-ホスフェート（リン酸塩）をもつポリヌクレオチドを生成するエンドヌクレアーゼです。Mg²⁺の存在下で、DNAse IはDNAの各鎖を独立的に切断し、切断部位はランダムです。両方のDNA鎖は、Mn²⁺の存在下でほぼ同じ部位で切断されます。至適pHは7～8です。Mn²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、およびZn²⁺などの二価カチオンは、酵素の活性化因子です。5 mMの濃度のCa²⁺は、タンパク質分解による断片化に対抗して酵素を安定化させます。ウシ膵臓由来のDNAse Iは、クロマトグラフィー的に識別可能な4つの構成要素A、B、C、およびDからなり、それらのモル比はそれぞれ4：1：1です。Dはごく微量で認められます。2-メルカプトエタノール、キレート剤、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）およびアクチンは、酵素活性を阻害することが知られています。

塩化カルシウムを含む凍結乾燥粉末

酵素粉末は、水またはリン酸緩衝液以外の何らかの緩衝液を用いて、pH 4.0～9.0で復元調製できます。カルシウムキレート剤の使用は避けるべきです。10 mg/mL DNAse Iの0.15 M NaCl溶液は、アリコートにして-20℃で1週間保存した場合、その活性の10%超が失われる場合があります。また、同じ溶液をアリコートにして2-8℃で保存した場合、約20%の活性が失われる可能性があります。これは、pH 5～7で60℃で5時間まで活性を維持しますが、68℃では10分未満で活性を失います。また、1 mg/mLの濃度の酢酸緩衝液（pH 5.0）および1 mg/mLのトリス緩衝液（pH 7.2）では、6%/時の速度で活性を失います。

タンパク質はビウレットにより測定します。

1 Kunitz単位は、タイプIまたはIIIのDNAを基質に使用して、pH 5.0、25℃、1 mLで、1分間に、0.001のΔA₂₆₀における吸光度変化を生成します。(1単位＝1 Kunitz単位)