エンドヌクレアーゼ

エンドヌクレアーゼ酵素は、DNAやRNAをより小さな断片に切断することで、バイオプロセスのワークフローや研究用途における核酸汚染レベルを低減するために使用されます。天然由来のものは多種多様に存在しますが、これらのエンドヌクレアーゼ製剤にはプロテアーゼ活性やウイルス性汚染物質が含まれている可能性があるため、課題となる場合があります。 Serratia marcescens由来の遺伝子組み換えヌクレアーゼであるBenzonase®エンドヌクレアーゼは、天然由来のエンドヌクレアーゼを使用する際のリスクを排除し、あらゆる形態のDNAおよびRNAを分解することができます。
適切な反応条件下で使用した場合、Benzonase® エンドヌクレアーゼは、あらゆる形態のDNAおよびRNA(一本鎖、二本鎖、線状、環状)を、長さが約3~5塩基対のオリゴヌクレオチドに分解します。この酵素は、検出可能なタンパク質分解活性を一切示さず、極めて高い比活性を有しています。
一部の製造用テンプレートでは、生理的濃度(200mM NaCl)を超える塩濃度を使用することが有益な場合があります。 Benzonase® Salt Tolerant エンドヌクレアーゼを使用することで、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターの生産におけるミッドストリーム溶解およびDNA消化ステップにおいて、200mM~1000mMのNaCl濃度を使用することが可能になります。Benzonase® 製品群に新たに加わったこの製品は、Triton™ X-100の代替品であるDeviron® 界面活性剤を含め、試験済みのすべての界面活性剤と互換性があります。
バイオプロセシングへの応用
Benzonase® エンドヌクレアーゼは、厳格なバイオプロセシング用途に最適です。本製品は、世界保健機関(WHO)および米国食品医薬品局(FDA)が要求する200塩基対の断片サイズをはるかに下回るレベルまで核酸を分解し、GMP IPE-PQG条件の下で出荷されており、規制当局への申請時に引用可能なFDA登録の医薬品マスターファイル(DMF)が整備されています。
本製品は、以下を含む幅広い操作条件および用途において有効です:
- ウイルスワクチンおよびウイルスベクターワクチンの精製
- 細胞療法および遺伝子療法の精製
- 腫瘍溶解性ウイルスの精製
- タンパク質およびその他の生物学的製剤からのDNAおよびRNAの除去
- 宿主細胞DNAの除去
さまざまな製造ニーズに対応するため、IPEG PQG GMP ベンゾナーゼ® エンドヌクレアーゼには3つのバージョンが用意されています。これらはすべて、規制当局への申請書類の作成を容易にするEmprove®プログラムの一部です(表1)。
Benzonase®エンドヌクレアーゼは、大腸菌W3110発現系で製造されており、ウイルス汚染のリスクは最小限に抑えられています。
- Benzonase® エンドヌクレアーゼ Emprove® Expert
- Benzonase® エンドヌクレアーゼ Safety Plus Emprove® Expert は、化学的に定義された培地で生産され、各ロットについて外来ウイルスおよびマイコプラズマが検出されないことが確認されています。
- Benzonase® Salt Tolerant エンドヌクレアーゼも化学的に定義された培地で生産されており、各バッチについてマイコプラズマの検査が行われています。また、ご要望に応じて、外来ウイルスの検査も実施可能です。
研究用途
Benzonase® エンドヌクレアーゼは、以下のようなさまざまな研究用途に使用できます:
- マイクロバイオーム試料からの宿主DNAの除去
- マイクロバイオーム研究における微生物分類群の同定精度の向上
- ワクチン研究における凝集の防止
- 組換えタンパク質抽出ワークフローにおけるライセートの粘度低減による、標的タンパク質の収率向上
高純度・高濃度のベンゾナゼ®エンドヌクレアーゼは、さまざまなオプションをご用意しています。
また、ワークフローをさらに円滑にするため、Benzonase® エンドヌクレアーゼとタンパク質抽出試薬がセットになった製品もご用意しています。
- BugBuster® マスターミックス:Benzonase® エンドヌクレアーゼおよび rLysozyme 溶液を含む BugBuster® タンパク質抽出試薬
- BugBuster® HT タンパク質抽出試薬:BugBuster タンパク質抽出試薬および Benzonase® エンドヌクレアーゼ
- CelLytic™ B Plus キット:リゾチーム、Benzonase® エンドヌクレアーゼ、およびプロテアーゼ阻害剤
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