바이러스 벡터 다운스트림 공정
바이러스 벡터 정제 공정은 역사적으로 단일클론 항체에 사용되던 시스템을 기반으로 해왔으나, 이러한 시스템은 필요한 수준의 회수율을 달성하도록 설계되지 않았습니다.
유전자 치료용 바이러스 벡터 다운스트림 공정을 위해 특별히 설계된 신기술의 도입은 수율과 처리량을 높일 수 있는 기회를 제공합니다. 바이러스 벡터 다운스트림 공정을 최적화하기 위해 활용할 수 있는 접근 방식으로는 다음이 있습니다:
- 초여과/디아필트레이션 공정, 특히 세포 또는 바이러스 수확 및 정제, 다운스트림 단백질 농축 및 디아필트레이션, 그리고 최종 제형 단계에서 접선 유동 여과(TFF)를 활용하는 경우
- 고생산성 일회용 크로마토그래피 막 흡착기와 같은 기술을 통해 단위 공정의 수와 규모를 줄여주는 강화된 크로마토그래피 공정
이러한 다운스트림 기술은 바이러스 벡터 정제 시간을 몇 시간에서 몇 분으로 단축하는 동시에 회수율을 높일 수 있는 잠재력을 지니고 있습니다. 또한, 이 기술들은 공정 확대를 용이하게 하고, 공정 공간을 줄이며, 시설 활용도를 높일 수 있습니다.
1차 정제
바이러스 벡터가 포함된 원액 매체는 심층 여과를 거치거나, 원심분리와 심층 여과를 병행하여 큰 세포 파편 및 기타 오염 물질을 제거합니다.
2차 정제
1차 정제 과정을 거친 정제 배지는 추가 단계를 통해 더욱 정제됩니다.
한외여과/디아필트레이션
한외여과와 다이아필트레이션은 각각 농축 및 완충액 교환에 사용됩니다. 바이러스 벡터는 크기 기반 여과를 통해 불순물로부터 분리됩니다. 다이아필트레이션은 염분 및 기타 분자를 제거하고, 이를 원하는 완충액으로 대체합니다.
크로마토그래피
이온 교환, 친화성, 크기 배제 등 최소 두 가지의 크로마토그래피 방법을 사용하여 바이러스 벡터를 정제합니다.
바이러스 여과
정제된 바이러스 벡터는 15나노미터 기공 크기의 나노여과를 거쳐 외래 바이러스, 내독소 및 기타 잔류 불순물과 응집체를 제거합니다.
무균 여과
무균 여과(또는 생물부하 저감)는 공정 중 여러 번 수행될 수 있습니다. 공급 유체는 0.4 또는 0.2 마이크론의 무균 등급 필터를 통과하여 공정 중에 유입된 박테리아 및 기타 미생물을 제거합니다.
최종 충전
정제되고 무균 처리된 바이러스 벡터를 최종 용기에 충전합니다. 안정성과 무결성을 보장하기 위해 제형, 포장재, 보관 조건에 대해 신중하게 고려해야 합니다.
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