Fabricación y formulación de ARNm

Secuencia de trabajo de la fabricación de ARNm

Liberar el poder de la tecnología de ARNm para revolucionar la forma de tratar y prevenir las enfermedades depende de procesos sólidos y uniformes para sintetizar el ARNm y luego purificarlo y formularlo. El acierto requiere el uso de productos de gran calidad con un rendimiento y servicios superiores proporcionados por expertos con amplia experiencia y un historial probado de éxito en este campo emergente.

Nuestra plantilla de fabricación de ARNm proporciona una consistente secuencia de trabajo, mientras que nuestros procesos de fabricación de LNP garantizan un suministro uniforme y de gran calidad.

Servicios de desarrollo y fabricación por contrato

Nuestras capacidades integradas incluyen el desarrollo y la fabricación de ARNm funcionales y ARN y ADN sintéticos largos, así como una oferta de productos de tecnología de ARNm, como los kits de aislamiento de ARN y de amplificación del ARNm. Estamos comprometidos con las interacciones directas y flexibles de los clientes con las industrias de ciencias de la vida y las instituciones académicas y de investigación de todo el mundo, incluido el soporte técnico sobre el terreno. Con nuestro procedimiento de trabajo probado, la fabricación de ARNm es muy reproducible y el producto final tiene una actividad superior. Las características fundamentales de nuestra oferta son:

• Producción de secuencias totalmente personalizables de hasta 13 000 nucleótidos
• Un requisito significativamente inferior (~10 000x) para el ADN plasmídico en comparación con los procesos de fabricación estándar del ARNm
• Proceso muy reproducible que produce ARNm con una cola poli A homogénea y un producto de alto rendimiento

Productos y servicios para productores de ARNm

• Producción de una plantilla de ADN plasmídico (ADNp)
• Linealización del ADNp con una enzima de sitio de restricción único
• Eliminación de la enzima de restricción, la BSA, los fragmentos de ADN, las endotoxinas y otras impurezas utilizando filtración de flujo tangencial (TFF) y cromatografía 
• Transcripción de la linealización del ADNp en ARNm utilizando la ARN polimerasa de bacteriófago
• Adición de la caperuza 5’ al ARNm para garantizar la estabilidad y la transducción eficiente en la célula

Purificación del ARNm

Después de la transcripción in vitro, el ARNm se purifica de las impurezas y los materiales utilizados en los pasos anteriores, como las endotoxinas, el inmunógeno ARN bicatenario (dsRNA), la plantilla de ADN residual, la ARN polimerasa y las impurezas elementales. Se dispone de varias opciones para la purificación del ARNm.

Productos y servicios para purificación del ARNm

• La filtración de flujo tangencial (TFF) proporciona una separación eficiente de las pequeñas impurezas no retenidas en la membrana. Pueden utilizarse valores de corte de peso molecular que oscilan entre 30 y 300 kDa en función del tamaño del ARNm. Con la TFF es posible purificar, concentrar y diafiltrar el producto en la misma operación.
• Pueden utilizarse varias técnicas de cromatografía, entre ellas la cromatografía de par iónico de fase inversa, de intercambio de aniones y de afinidad mediante la captura de poli(dT). La cromatografía se utiliza después de la colocación enzimática de la caperuza para eliminar los productos no deseados y las impurezas oligonucleotídicas
• Se realiza una etapa final de concentración y diafiltración para maximizar la pureza del producto y transferir el ARNm a los tampones adecuados para su formulación o almacenamiento. En esta etapa, el ARNm puede purificarse, concentrarse y diafiltrarse en la misma operación.

 Formulación de ARNm

El ARNm desnudo es inestable y se necesitan sistemas de administración de fármacos, como las nanopartículas lipídicas (LNP), para entregar el ARNm a las células diana. La calidad de las materias primas utilizadas para sintetizar los lípidos, así como el tipo y la fuente de lípidos, tienen un impacto directo en el perfil de impurezas, las características de las partículas, la estabilidad de las partículas y el perfil de liberación de la formulación final. Ofrecemos una variedad de lípidos personalizados y de cartera para diseñar la LNP más apropiada para su aplicación de ARNm.

Protección del ARNm

La producción de ARNm estable requiere un proceso robusto y el uso de productos químicos y materias primas que minimicen el riesgo de degradación por la actividad de la ARNasa o la contaminación microbiana. Para proteger el ARNm durante su fabricación, purificación y formulación, nuestras materias primas de gran calidad Emprove^® Expert se someten a pruebas de actividad endonucleasa y tienen bajos niveles de endotoxinas y de grado de contaminación microbiana. Nuestras materias primas cumplen también los requisitos de las GMP del IPEC-PQG.