Production et formulation d'ARNm

Procédure de production d'ARNm

Pour exploiter tout le potentiel de la technologie de l'ARNm et révolutionner le traitement et la prévention des maladies, il faut disposer de protocoles de production, de purification et de formulation fiables et reproductibles. La réussite passe alors par l'utilisation de produits de qualité hautement performants et le concours d'experts chevronnés qui ont fait leurs preuves dans ce domaine en plein essor.

Nous produisons l'ARNm selon une procédure standard fiable. Nos procédés de fabrication de nanoparticules lipidiques garantissent quant à eux la constance et la qualité des approvisionnements.

Services de développement et de production en sous-traitance

Nos capacités intégrées incluent la mise au point et la production d'ARNm fonctionnels et de longs ADN et ARN synthétiques ainsi qu'une offre de produits pour la technologie ARNm, comme des kits d'isolement de l'ARN et d'amplification de l'ARNm. Nous avons à cœur d'interagir de manière directe et ouverte avec nos clients du monde entier, qu'il s'agisse d'entreprises du secteur des sciences de la vie ou de centres de recherche universitaires, en leur proposant notamment une assistance technique sur site. Grâce à notre procédure éprouvée, la production d'ARNm est hautement reproductible et le produit final présente une excellente activité. Voici les principaux avantages de notre offre :

• Production de séquences entièrement personnalisables comptant jusqu'à 13 000 nucléotides
• Un procédé nécessitant beaucoup moins d'ADN plasmidique (~10 000 fois moins) que les procédés de production d'ARNm classiques
• Procédé hautement reproductible donnant un ARNm portant une queue poly A homogène et un produit ultraperformant

Produits et services destinés aux sites de production d'ARNm

• Production d'une matrice d'ADN plasmidique (ADNp)
• Linéarisation de l'ADNp par une seule enzyme de restriction
• Élimination de l'enzyme de restriction, de la sérum albumine bovine, des fragments d'ADN, des endotoxines et autres impuretés par filtration tangentielle et chromatographie 
• Transcription de l'ADNp linéarisé en ARNm avec une ARN polymérase de bactériophage
• Ajout d'une coiffe en 5' à l'ARNm pour garantir sa stabilité et sa bonne transduction dans la cellule

Purification de l'ARNm

Une fois transcrit in vitro, l'ARNm est débarrassé de ses impuretés ainsi que des matières utilisées dans les étapes précédentes : endotoxines, ARN double brin (ARNdb) immunogènes, matrices d'ADN résiduelles, ARN polymérases, impuretés élémentaires… Il existe plusieurs moyens de purifier l'ARNm.

Produits et services associés à la purification de l'ARNm

• La filtration tangentielle permet une séparation efficace des petites impuretés non retenues par la membrane. Le seuil de coupure utilisé peut varier de 30 à 300 kDa selon la taille de l'ARNm. La filtration tangentielle permet de réaliser une purification, une concentration et une diafiltration au sein d'une même opération unitaire.
• Plusieurs techniques de chromatographie peuvent être utilisées, notamment la chromatographie de paires d'ions en phase inverse, la chromatographie d'échange d'anions et la chromatographie d'affinité avec capture sur poly(dT). La chromatographie est réalisée après la réaction enzymatique d'ajout de la coiffe afin d'éliminer les produits non souhaités et les impuretés d'oligonucléotides.
• Une étape finale de concentration et de diafiltration est réalisée pour maximiser la pureté du produit et transférer l'ARNm dans les tampons appropriés en vue d'une formulation ou d'un stockage. À cette étape, l'ARNm peut être soumis à une purification, une concentration et une diafiltration supplémentaires au sein d'une même opération unitaire.

 Formulation de l'ARNm

L'ARNm nu étant instable, il faut des systèmes de délivrance de médicament, comme des nanoparticules lipidiques, pour libérer l'ARNm dans les cellules cibles. La qualité des matières premières utilisées pour synthétiser les lipides, le type de lipide et son origine ont un impact direct sur le profil d'impuretés, les caractéristiques des particules, leur stabilité et le profil de libération de la formulation finale. Nous proposons un choix de lipides de série et sur mesure pour que vous puissiez concevoir les particules lipidiques qui conviennent le mieux à votre application d'ARNm.

Protection de l'ARNm

La production d'un ARNm stable nécessite un procédé fiable ainsi que des produits chimiques et des matières premières qui minimisent les risques de dégradation par les RNAses ou par contamination microbienne. Pour protéger votre ARNm pendant la production, la purification et la formulation, misez sur la qualité de nos matières premières Emprove^® Expert : elles sont testées pour garantir l'absence d'endonucléases et présentent une faible charge microbienne et un faible taux d'endotoxines. Nos matières premières respectent aussi les exigences du Guide des bonnes pratiques de fabrication des excipients à usage pharmaceutique publié conjointement par l'IPEC et le PQG.